【地方标准】 家畜尿液中莱克多巴胺的快速测定 检测卡法

DB37/T1679—2010
家畜尿液中莱克多巴胺的快速测定检测卡法
(Rapid determination of ractopamine in livestock urine-Test strip)
2010-10-19发布
山东省质量技术监督局
2010-11-01实施

前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出。本标准由畜牧业专业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省饲料质量检验所。本标准起草人：孟凡胜、宫玲玲、李会荣、刘明、李德钊。

1 范围
本标准规定了用检测卡快速测定家畜尿液中莱克多巴胺的方法，本标准适用于家畜尿液。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T763 猪肉、猪肝、猪尿抽样方法。

3 原理
将莱克多巴胺和莱克多巴胺抗体分别包被在检测卡纤维素膜的不同带区：滴加在膜条一端的样液在毛细管作用下渗移，与检测卡上的莱克多巴胺和莱克多巴胺抗体发生竞争抑制免疫反应，胶体金显色定性。

4 试剂和材料
4.1 莱克多巴胺标准储备液：准确称取50mg莱克多巴胺标准品（含量≥98%），用甲醇（分析纯）溶解并定容至50mL，该溶液浓度为1.0mg/mL。4℃冰箱中贮存，有效期6个月。
4.2 莱克多巴胺标准工作液：准确移取50μL莱克多巴胺标准储备溶液（4.1），用甲醇（分析纯）稀释并定容至50mL，该溶液浓度为1.0μg/mL。4℃冰箱中贮存，有效期1个月。
4.3 一次性纸杯：100mL。
4.4 一次性滴管。
4.5 检测卡。
4.6 莱克多巴胺阴性样品：采集确认未饲喂莱克多巴胺的家畜尿液或经质谱法确证不含莱克多巴胺的家畜尿液。2℃～8℃冷藏保存。

5 仪器
5.1 离心机：转速3000r/min以上。
5.2 离心管：1.5ml。
5.3 移液枪：1000μL，100μL。

6 样品
6.1 样品的采集
猪尿液样品：按NY/T763标准用干燥、洁净的一次性纸杯（4.3）采集尿液。
其他动物尿液样品：参照NY/T763标准用干燥、洁净的一次性纸杯（4.3)采集尿液。
6.2 样品的保存
如果不立即检测，宜在2℃～8℃冷藏保存。
6.3 样品的处理
澄清尿液样品不需要处理；浑浊的尿液样品，用离心机（5.1）离心10min后取上清液备用。

7 检测卡的验证
7.1 阴性样品验证
每一批次按5%的比例抽取检测卡，最少抽取一个，使用阴性样品（4.6）依检测卡说明书测定步骤做阴性验证试验。如果有一个及以上检测卡不符合时，在同一批次内加倍随机抽取检测卡做阴性验证试验。再次抽取检测卡的验证试验应全部符合。
7.2 阳性样品验证
用移液枪（5.3）移取阴性样品（4.6）900μL于离心管（5.2）内，加入莱克多巴胺标准工作液（4.2）100μL，充分混合，该尿溶中莱克多巴胺的浓度为100ng/mL，用此尿液按说明书标识的检测限，配制成含莱克多巴胺与检测限相同的样品。每一批次按10%的比例抽取检测卡，最少抽取两个检测卡，使用该样品依检测卡说明书测定步骤做阳性验证试验。如果有一个及以上检测卡不符合时，在同一批次内加倍随机抽取检测卡做阳性验证试验。再次抽取检测卡的验证试验应全部符合。
7.3 检测卡的综合评价
在确认阴性验证试验和阳性验证试验同时符合时，该批次的检测卡方可使用。

8 分析步骤
检测卡（4.5）放置于水平台面上恢复至检测卡要求的温度后，取出检测卡进行检测。检测卡即开即用。
用一次性滴管（4.4）吸取尿液样品，垂直滴加3～4滴于检测卡（4.5）样孔内。在加液过程中勿使样品溶液溢出加样孔。加样后开始计时，在5min～10min内判读结果。注：不同品牌的检测卡其测定步骤略有差别，使用不同品牌检测卡时，分析步骤根据检测卡的说明书进行。

9 结果判定
9.1 检测卡无效：检测卡的质控区C线未显示红色条带（见附录A中图A.1），此情况下，应用新的检测卡重新测定。
9.2 阳性反应
9.3 阴性反应