【地方标准】 天然植物提取物中危害成分的检测 第12部分：甜菊糖苷中邻苯二甲酸酯的测定

DB13/T5189.12—2020 天然植物提取物中危害成分检测 第12部分：甜菊糖苷中邻苯二甲酸酯的测定
发布日期：2020-06-28
实施日期：2020-07-28
发布单位：河北省市场监督管理局

前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。DB13/T5189《天然植物提取物中危害成分的测定》共分12个部分：第1部分：亚硝酸盐的测定；第2部分：二氧化硫的测定；第3部分：正己烷、丙酮、乙酸乙酯、甲醇和乙醇5种有机溶剂残留的测定；第4部分：辣椒提取物中砷、铅、镉、铬、汞的测定；第5部分：万寿菊提取物中对氧基苯胺的测定；第6部分：万寿菊提取物中乙氧基喹啉的测定；第7部分：天然番茄红中苯并[α]芘的测定；第8部分：辣椒提取物中苏丹红的测定；第9部分：辣椒提取物中叔丁基对苯二酚的测定；第10部分：辣椒红中赭曲霉毒素A的测定；第11部分：叶黄素中苯的测定；第12部分：甜菊糖苷中邻苯二甲酸酯的测定。本部分为DB13/T5189的第12部分。本标准由河北省市场监督管理局提出。本标准起草单位：河北省食品检验研究院、晨光生物科技集团股份有限公司、石家庄海关技术中心、清河县食品药品检验检测中心。
本标准主要起草人：张兰天、王如景、焦良、刘东、杨新涛、冯默、艾连峰。

1 范围
本部分规定了甜菊糖苷中邻苯二甲酸酯的测定方法。本部分适用于甜菊糖苷中邻苯二甲酸二甲酯（DMP）、邻苯二甲酸二乙酯（DEP）、邻苯二甲酸二异丁酯（DIBP）、邻苯二甲酸二丁酯（DBP）、邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯（DMEP）、邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯（BMPP）、邻苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯（DEEP）、邻苯二甲酸二戊酯（DPP）、邻苯二甲酸二己酯（DHXP）、邻苯二甲酸二丁基酯（BBP）、邻苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯（DBEP）、邻苯二甲酸二环己酯（DCHP）、邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）、邻苯二甲酸二苯酯（DPhP）、邻苯二甲酸二正辛酯（DNOP）、邻苯二甲酸二壬酯（DNP）的测定。本部分适用于天然植物提取物甜菊糖苷中邻苯二甲酸酯的测定。

2 原理
试样经提取后，采用气相色谱-质谱法测定。采用特征选择离子监测扫描模式（SIM），以保留时间和定性离子碎片丰度比定性，外标法定量。

3 试剂或材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为色谱纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂
正己烷（n-hexane）。
3.2 标准品
16种邻苯二甲酸酯标准品：邻苯二甲酸二甲酯（DMP）、邻苯二甲酸二乙酯（DEP）、邻苯二甲酸二异丁酯（DIBP）、邻苯二甲酸二丁酯（DBP）、邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯（DMEP）、邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯（BMPP）、邻苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯（DEEP）、邻苯二甲酸二戊酯（DPP）、邻苯二甲酸二己酯（DHXP）、邻苯二甲酸二丁基酯（BBP）、邻苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯（DBEP）、邻苯二甲酸二环己酯（DCHP）、邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）、邻苯二甲酸二苯酯（DPhP）、邻苯二甲酸二正辛酯（DNOP）、邻苯二甲酸二壬酯（DNP），混合液体标准品，浓度为100 $mu$g/mL。标准品信息、纯度见附录A。
3.3 标准溶液配制
3.3.1 邻苯二甲酸酯标准储备溶液（8 mg/L）：吸取0.2 mL 1000 mg/L混合标样，至25 mL容量瓶中，用正己烷定容，得到浓度约为8 mg/L的标准储备溶液，置于4℃冰箱保存，有效期2个月。
3.3.2 邻苯二甲酸酯标准使用溶液（0.08 mg/L）：吸取1 mL 8 mg/L标样，至100 mL容量瓶中，用正己烷定容，得到浓度约为0.08 mg/L的标准工作液，置于4℃冰箱保存，有效期2个月。

4 仪器和设备
4.1 气相色谱-质谱联用仪。
4.2 分析天平：感量0.1 mg。
4.3 超声清洗器。
4.4 涡旋振荡器。
4.5 离心机：转速 $ge$ 5000 r/min。

5 分析步骤
5.1 试样制备
准确称取样品0.2 g（精确至0.0001 g）于10 mL玻璃试管中，加入1 mL水，涡旋，超声溶解后加入1 mL正己烷，涡旋30 s后，离心（5000 r/min，5 min），取上清液，待测。按上述条件，同时做空白试验。
5.2 色谱质谱参考条件
5.2.1 色谱参考条件
a) 色谱柱：5%苯基-甲基聚硅氧烷毛细管色谱柱，柱长：30 m，内径：0.25 mm，膜厚：0.25 $mu$m，或性能相当者；
b) 进样口温度：250℃；
c) 程序升温：初始柱温60℃，保持1 min，以20℃/min升温至220℃，保持1 min，再以5℃/min升温至280℃，保持4 min；
d) 载气：氨气（纯度 $ge$ 99.999%），流速1.0 mL/min；
e) 进样量：1 $mu$L；
f) 进样方式：不分流进样。
5.2.2 质谱参考条件
a) 色谱与质谱接口温度：280℃；
b) 离子源类型：电子轰击离子源（EI）；
c) 碰撞室气体：氢气（纯度 $ge$ 99.999%）；
d) 电离能量：70 eV；
e) 溶剂延迟：5 min；
f) 监测方式：选择离子监测模式（SIM），保留时间及监测离子对见附录C。
5.3 测定
5.3.1 定性确认
在5.2仪器条件下，试样待测液和标准品的选择离子色谱峰在相同保留时间处（$pm$ 2.5%）出现，并且对应质谱碎片离子的质荷比与标准品一致，其丰度比与标准品相比符合：相对丰度 > 50%时，允许 $pm$ 20%的偏差；相对丰度 20%～50%时，允许 $pm$ 25%的偏差；相对丰度 10%～20%时，允许 $pm$ 30%的偏差；相对丰度 $le$ 10%时，允许 $pm$ 50%的偏差。满足上述条件时可定性确证目标分析物，参见附录。
5.3.2 定量分析
将得到的定量离子峰面积扣除空白溶液中对应的定量离子峰面积后，代入式（1），采用外标法单点定量。

6 试验结果
试样中某种邻苯二甲酸酯的含量按式（1）计算：
X = (A $ imes$ c $ imes$ V) / (m $ imes$ A_s)
式中：
X — 试样中某种邻苯二甲酸酯的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
A — 试样中某种邻苯二甲酸酯的色谱峰面积；
c — 标准工作液中某种邻苯二甲酸酯的浓度，单位为微克每毫升（$mu$g/mL）；
V — 试样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；
A_s — 标准工作液中某种邻苯二甲酸酯的色谱峰面积；
m — 试样质量，单位为克（g）。
计算结果需扣除空白值，计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留三位有效数字。

7 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。

8 检出限和定量限
方法的检出限（LOD）为0.05 mg/kg，定量限为0.016 mg/kg。