【地方标准】 天然植物提取物中危害成分的检测 第9部分：辣椒提取物中叔丁基对苯二酚的测定

DB13/T5189.9—2020 天然植物提取物中危害成分检测 第9部分：辣椒提取物中叔丁基对苯二酚的测定

前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。DB13/T5189《天然植物提取物中危害成分的测定》共分12个部分：第1部分：亚硝酸盐的测定；第2部分：二氧化硫的测定；第3部分：正己烷、丙酮、乙酸乙酯、甲醇和乙醇5种有机溶剂残留的测定；第4部分：辣椒提取物中砷、铅、镉、铬、汞的测定；第5部分：万寿菊提取物中对氧基苯胺的测定；第6部分：万寿菊提取物中乙氧基喹啉的测定；第7部分：天然番茄红中苯并[α]芘的测定；第8部分：辣椒提取物中苏丹红的测定；第9部分：辣椒提取物中叔丁基对苯二酚的测定；第10部分：辣椒红中赭曲霉毒素A的测定；第11部分：叶黄素中苯的测定；第12部分：甜菊糖苷中邻苯二甲酸酯的测定。本部分为DB13/T5189的第9部分。
本标准由河北省市场监督管理局提出。本标准起草单位：河北省食品检验研究院、晨光生物科技集团股份有限公司、石家庄海关、清河县食品药品检验检测中心。
本标准主要起草人：王红、张凤霞、焦良、李挥、田俊生、卜丽双、艾连峰。

1 范围
本部分规定了辣椒提取物中叔丁基对苯二酚的测定方法。本部分适用于辣椒提取物中叔丁基对苯二酚的测定。

2 原理
辣椒提取物中叔丁基对苯二酚经环己烷-乙酸乙酯溶解后，使用凝胶渗透色谱（GPC）净化，采用反相C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱，以乙腈-1.0%乙酸水（40:60）为流动相，等度洗脱，荧光检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。

3 试剂或材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂
3.1.1 甲醇（CH₃OH）：色谱纯。
3.1.2 乙腈（CH₃CN）：色谱纯。
3.1.3 冰醋酸（CH₃COOH）。
3.1.4 环己烷（(CH₂)₆）。
3.1.5 乙酸乙酯（CH₃COOCH₂CH₃）。
3.2 试剂配制
环己烷-乙酸乙酯（1:1，V/V）：量取500mL环己烷与500mL乙酸乙酯混合均匀。
3.3 标准品
叔丁基对苯二酚（Tert-butylhydroquinone，C₈H₁₀O₂，CAS: 1948-33-0）标准物质，纯度≥99%，或采用具有标准物质证书的叔丁基对苯二酚标准溶液。
3.4 标准溶液配制
3.4.1 叔丁基对苯二酚标准储备溶液（1000mg/L）：准确称取叔丁基对苯二酚标准物质100.00mg，用甲醇定容至100mL，摇匀，0℃～4℃避光保存，有效期6个月。
3.4.2 叔丁基对苯二酚标准使用溶液（10mg/L）：准确量取1000mg/L叔丁基对苯二酚标准储备液1mL，于100mL容量瓶中，用甲醇溶解，定容于100mL，0℃～4℃避光保存，有效期6个月。
3.4.3 叔丁基对苯二酚标准系列工作溶液：分别吸取叔丁基对苯二酚标准使用溶液0mL、0.1mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、5.0mL、10.0mL，用甲醇定容至10mL，配制成质量浓度分别为0.1mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L的混合标准使用液，现用现配。

4 仪器和设备
4.1 高效液相色谱仪：配有荧光检测器。
4.2 凝胶渗透色谱净化系统（GPC）。
4.3 分析天平：感量0.1mg和0.01mg。
4.4 涡旋混匀器。
4.5 超声波清洗器。
4.6 离心机：转速≥3000r/min。
4.7 旋转蒸发仪。

5 试验步骤
5.1 提取
准确称取样品1g（精确至0.0001g）于10mL容量瓶中，加入环己烷-乙酸乙酯（1:1，V/V）混合溶液溶解，定容，摇匀，上清液过0.45μm有机滤膜后作待净化液。
5.2 净化
取待净化液于GPC样品管中，进行GPC净化，进样量5mL，收集洗脱液，于40℃下旋转蒸发至干。残渣用1.0mL甲醇超声溶解，过0.45μm有机滤膜，供液相色谱检测。
凝胶渗透色谱净化参考条件：
凝胶渗透色谱净化系统：
a) 凝胶柱规格：400mm×25mm（内径）；
b) 填料：Bio-Beads S-X3（38-75μm）；
c) 流动相：环己烷-乙酸乙酯（1:1，V/V）；
d) 流速：4.7mL/min；
e) 收集时间：25-35min。
5.3 测定
5.3.1 色谱参考条件
a) 色谱柱：C18，粒径5μm，250mm×4.6mm（内径），或性能相当者；
b) 流动相：乙腈-1.0%乙酸水（40:60）等度洗脱；
c) 柱温：40℃；
d) 激发波长：293nm；发射波长：332nm；
e) 流速：1.0mL/min；
f) 进样量：20μL。
5.3.2 测定
根据样液中叔丁基对苯二酚含量情况，选定与样液浓度相近的标准使用溶液，标准使用溶液和样液中的叔丁基对苯二酚响应值均应在仪器检测的线性范围内。如果样液中叔丁基对苯二酚含量超出检测的线性范围，则稀释至适当倍数后再次进样。以保留时间定性，外标法定量。叔丁基对苯二酚液相色谱图参见附录A。
按上述条件，同时做空白试验。

6 试验结果
试样中叔丁基对苯二酚含量按式（1）计算：
X = (c - c₀) * V * f / m
式中：
X一试样中叔丁基对苯二酚的含量，单位为毫克每千克，mg/kg；
c一试样溶液中叔丁基对苯二酚的浓度，mg/L；
c₀—空白试样溶液中叔丁基对苯二酚的浓度，mg/L；
V一样液最终定容体积，单位为毫升，mL；
f—稀释倍数；
m—试样溶液代表试样的质量，g。
计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

7 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

8 检出限和定量限
检出限为0.02mg/kg，定量限为0.06mg/kg。