【地方标准】 百香果（西番莲）病毒检测技术规程

本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》规定起草。 本文件由福建省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：福建省种植业技术推广总站、福建省农业科学院果树研究所。本文件主要起草人：李韬、谢丽雪、施清、杨建榕、张立杰、张小艳、郑姗、谢钟琛、林诚智。 1 范围 本文件规定了百香果主要病毒的检测对象、仪器设备、用具及试剂、抽样、检测、结果判定、结果记录、样品保存和归档。 本文件适用于百香果上主要病毒（东亚西番莲病毒、夜来香花叶病毒、黄瓜花叶病毒）的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 SN/T 2122 进出境植物及植物产品检疫抽样方法 SN/T 2964 植物病毒检测规范 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 检测对象 选择西番莲生产分布范围广、危害严重的东亚西番莲病毒（BastAsianpassifloravirus, EAPV）、夜来香花叶病毒（Telasmamosaicvirus, TeMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumbermosaicvirus, CMV）为标准检测对象，各病毒的信息参见附录。 5 仪器设备、用具及试剂 5.1 仪器设备 高速冷冻离心机、电子天平（1/1000g）、PCR仪、电泳仪、小平电流槽、-20℃低温冰箱和-80℃超低温冰箱、凝胶成像分析系统、pH计、微波炉、磁力搅拌器、恒温水锅、高压灭菌锅、酶标仪等。 5.2 用具 各种量程的可调移液器（1000μL、200μL、100μL、20μL、10μL、2μL）、PCR反应管、无RNase的PCR离心管（1.5mL）、研钵、酶联板等。 5.3 试剂 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T 6682中相关规定。DAS-ELISA试剂按照附录B要求，RT-PCR试剂按照附录C要求。 6 抽样 有病毒危害症状的植物材料（叶、果实）单独抽样；无危害症状的植物材料（叶、果实）抽样方法按照SN/T 2122和SN/T 2964中规定执行。 7 检测 7.1 DAS-ELISA DAS-ELISA具体方法按照附录B检测。 7.2 RT-PCR RT-PCR具体方法按照附录C检测。 8 结果判定 8.1 东亚西番莲病毒 若样品经DAS-ELISA、RT-PCR检测结果均为阳性，则判定为检出EAPV；若样品经RT-PCR检测为阳性，且序列测定结果为该病毒核酸序列，则判定为检出EAPV；反之，则判定为未检出EAPV。 8.2 夜来香花叶病毒 若样品经DAS-ELISA、RT-PCR检测结果均为阳性，则判定为检出TeMV；若样品经RT-PCR检测为阳性，且序列测定结果为该病毒核酸序列，则判定为检出TeMV；反之，则判定为未检出TeMV。 8.3 黄瓜花叶病毒 若样品经DAS-ELISA、RT-PCR检测结果均为阳性，则判定为检出CMV；若样品经RT-PCR检测为阳性，且序列测定结果为该病毒核酸序列，则判定为检出CMV；反之，则判定为未检出CMV。 9 结果记录 记录包括样品来源、样品种类、检测时间、检测地点、检测方法及结果、检测人员签字。DAS-ELISA检测应有酶联反应数值；RT-PCR检测应有电泳图片。 10 样品保存和归档 经检测结果判定为阳性的样品应妥善保存在-20℃～-80℃冰箱中，并作好登记和标记工作，以备复核用。 附录A（资料性） 东亚西番莲病毒、夜来香花叶病毒、黄瓜花叶病毒的背景资料 A.1.1 东亚西番莲病毒 学名：EastAsianpassifloravirus，缩写：EAPV。分类地位：马铃薯Y病毒科（Potyviridae）、马铃薯Y病毒属（Potyvirus）成员。 A.1.2 夜来香花叶病毒 学名：Telosmamosaicvirus，缩写：TeMV。分类地位：马铃薯Y病毒科（Potyviridae）。