【地方标准】 人参中异菌脲残留量的测定-高效液相色谱法

DB22/T1230—2011
人参中异菌脲残留量的测定-高效液相色谱法
Determination of iprodione residues in ginseng-method of high performance liquid chromatography

前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由吉林省农业委员会提出并归口。本标准起草单位：吉林农业大学（农业部参茸产品质量监督检验测试中心）。本标准主要起草人：李月茹、陈颖、陈丹、许煊炜、张敏、孟欣欣、陈晓林。

1 范围
本标准规定了用高效液相色谱法测定人参（Panax ginseng C.A.Mey.）异菌脲残留量的方法。本标准适用于鲜人参、生晒参和红参中异菌脲残留量的测定。本标准方法的定量限为0.18mg/kg。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法。
《中华人民共和国药典》2010年版。

3 原理
试样中异菌脲经有机溶剂提取、氨基固相萃取小柱净化、浓缩、定容，微孔滤膜过滤后进样，用反相高效液相色谱分离，紫外检测器检测，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。

4 试剂与材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯试剂，实验用水为GB/T 6682-2008中规定的一级水。
4.1 二氯甲烷（CH₂Cl₂）：优级纯。取二氯甲烷300mL置旋转蒸发仪中，浓缩至5mL，在本实验色谱条件下进样5次，测定至高效液相色谱检测无干扰物。
4.2 甲醇（CH₃OH）。
4.3 甲醇-二氯甲烷溶液［（CH₃OH + CH₂Cl₂）=4 + 1］。
4.4 石油醚（60-90℃）。
4.5 丙酮（CH₃COCH₃）。
4.6 石油醚-丙酮溶液（4+1）。
4.7 乙腈（CH₃CN）：色谱纯（HPLC）。
4.8 无水硫酸钠（Na₂SO₄）：350℃灼烧2h，冷却后置干燥器备用（0℃-4℃密封保存三个月）。
4.9 2%硫酸钠溶液：称取20g无水硫酸钠（见4.8），加水溶解定容至1000mL。
4.10 异菌脲标准品：C₁₃H₁₃Cl₂NO₃，CAS号：36734-19-7，含量为99.5%。
4.11 异菌脲标准贮备液：准确称取0.0500g异菌脲标准品（见4.10），用乙腈（见4.7）溶解并转入50mL容量瓶，用乙腈（见4.7）定容，得到1000mg/L的标准贮备液，贮存在-4℃以下冰箱中，保质期6个月。
4.12 异菌脲标准工作液：使用时根据异菌脲在紫外检测器上的响应值，准确吸取适量的异菌脲标准贮备液（见4.11），逐级稀释，用乙腈（见4.7）稀释配制成所需的标准工作液。并分别配制成质量浓度为0.1、0.2、0.5mg/L的标准系列溶液，作标准工作液的标准曲线。
4.13 固相萃取小柱：氨基固相萃取（SPE）小柱。容积6mL，填充物1000mg，市售。
4.14 微孔滤膜：针孔式滤膜，滤膜孔径为0.22μm，尼龙膜。

5 仪器设备
5.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器。
5.2 旋转蒸发仪。
5.3 超음波发生器。
5.4 分析天平：感量0.1mg和0.0001g。

6 试样的制备
取不少于100g人参干样（鲜样用组织捣碎机捣碎后60℃烘干），用粉碎机粉碎，过60目筛，充分混匀后装瓶密封，置于冷冻室内-18℃保存，待测。

7 分析步骤
7.1 提取
称取人参试样1g（精确至0.0001g），置于50mL具塞锥形瓶中，用石油醚-丙酮溶液（见4.6）作为提取液，先用10mL提取液浸泡2h，然后在超声波发生器中提取三次，其中每次加入的提取液均为10mL，每次30min，滤纸过滤。用15mL丙酮（见4.5）分三次洗涤锥形瓶与残渣并过滤。合并滤液置分液漏斗中，加入2%硫酸钠溶液（见4.9）20mL，振荡，净置分层后，弃去水层，有机层过无水硫酸钠（见4.8）层析柱转至平底烧瓶中，并用15mL石油醚（见4.4）三次洗涤硫酸钠层析柱，合并洗液至100mL平底烧瓶中。
7.2 净化
7.2.1 浓缩
将盛有淋洗液的100mL平底烧瓶用旋转蒸发仪在40℃水浴、40rpm和低于0.08MPa条件下，浓缩至试样少于1mL，取下用氮气吹至近干，立即加入2.0mL甲醇-二氯甲烷（见4.3）洗脱液，摇匀后待净化。