【地方标准】 马铃薯晚疫病菌PCR检测方法

ICS 65.020.01
CCS B16
DB15
内蒙古自治区地方标准
DB15/T2957—2023

马铃薯晚疫病菌PCR检测方法
Detection of pathogenic fungus for potato late blight by PCR method

2023-04-26发布
2023-05-26实施
内蒙古自治区市场监督管理局 发布

目次
前言
1 范围
2 规范性引用文件
3 术语和定义
4 原理
5 试剂与仪器
5.1 试剂
5.2 溶液配制
5.3 仪器
6 操作步骤
6.1 对照的设立
6.2 取样
6.3 马铃薯组织样品DNA提取
6.4 PCR扩增
7 琼脂糖凝胶电泳
8 结果判定
8.1 试验成立的条件
8.2 结果判定

前言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。

本文件由内蒙古自治区马铃薯标准化技术委员会（SAM/TC 40）归口。

本文件起草单位：内蒙古自治区产品质量检验研究院、内蒙古中加农业生物科技有限公司、乌兰察布市检验检测中心、内蒙古朱日和镇综合保障和技术推广中心。

本文件主要起草人：刘广晶、刘晓权、包美丽、高晓娟、吕文霞、赵莉、高俊、齐桂敏、姜涛、李燕、田艳花、赵欣、孙辉远、任玮、常青、侯晓云、李建青、李艺凡、李翔、王慧娟、董志刚、王勐、乔奇、王美霞。

1 范围
本文件规定了马铃薯晚疫病菌PCR检测方法。

本文件适用于马铃薯植株、块茎中晚疫病菌的检测。

2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。

3.1 马铃薯晚疫病（potato late blight）
由致病疫霉（Phytophthora infestans（Montagne）de Bary）侵染引起的马铃薯病害。可侵染马铃薯叶片、茎秆以及块茎等部位。发病初期，病斑多在叶尖和叶缘处形成水浸状褪绿斑，后扩大为圆形暗绿色病斑，病斑边缘界限不明显。在空气湿度较大时，病斑可扩展至叶片大半甚至全叶，病斑边缘有一圈白色稀疏霉轮。茎部受害后，可形成长短不一的褐色斑。块茎发病初期为褐色或紫褐色不规则病斑，稍凹陷，后期导致薯肉不同深度褐色坏死。在潮湿条件下，茎秆和块茎发病部位能够形成白色稀疏霉层。

4 原理
本文件采用聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）方法检测马铃薯晚疫病菌。其原理是：以马铃薯晚疫病菌ITS序列区设计特异性引物，以基因组DNA为模板，在Taq DNA聚合酶作用下进行PCR扩增，根据PCR扩增结果判断该样品中是否含有目的片段，从而达到鉴定马铃薯晚疫病菌的目的。

5 试剂与仪器

5.1 试剂
5.1.1 以下所有试剂除另有规定外，均使用分析纯试剂；水为符合GB/T 6682中规定的一级水。

5.1.2 植物基因组提取试剂盒、2×Taq PCR Master Mix、无水乙醇、50×TAE电泳缓冲液、溴化乙锭、DNA Marker、6×DNA Loading Buffer等均从试剂公司购买。