【地方标准】 青海藏羊胚胎玻璃化冷冻制作规程

ICS65.020.30
B43
备案号：60857-2018
DB63/T1693—2018
青海藏羊胚胎玻璃化冷冻制作规程
发布日期：2018-09-25
实施日期：2018-12-01
发布单位：青海省质量技术监督局

前言
本规程按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由青海省农牧厅提出并归口。起草单位为青海省家畜改良中心。主要起草人包括莫延新、谢秀梅、冯宇诚、张晋青、补海平、袁海洲、王廷艳、杨玉芹、李梦怡、谭建宁、扈添琴、潘顺利、马元梅、胡宁玺、白坤云。

1 范围
本标准规定了青海藏羊胚胎玻璃化冷冻制作过程中供体羊的选择与饲养管理、超数排卵、准备工作、手术冲胚、胚胎质量鉴定、胚胎玻璃化冷冻、标记和贮存等内容。本规程适用于青海省高原型、山谷型、欧拉型藏羊冷冻胚胎制作。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡注日期的引用文件，仅适用于该日期版本。凡不注日期的引用文件，其最新版本（包括修改单）适用：
GB/T5458 液氮生物容器
胚胎质量检测技术规程 NY/T1674
DB63/T039 青海藏羊
DB63/T547.1 青海藏羊饲养管理技术规范

3 术语及定义
3.1 供体羊：提供胚胎的羊个体。
3.2 超数排卵：利用生殖激素提高供体羊同期卵泡发育数量和排卵数量的技术。
3.3 冲胚：配种后第7天使用冲卵管等装置将供体母羊子宫内胚胎冲洗出来的过程。
3.4 检胚：对胚胎进行清洗、质量鉴定和分级的过程。
3.5 超低温保存：胚胎置于液氮中长期保存的方法。
3.6 胚胎玻璃化冷冻：应用高浓度防冻剂使胚胎内外液快速形成玻璃态结构，并直接投入液氮保存的技术。

4 种公羊的选择和饲养管理
4.1 种公羊选择
体型外貌及生长发育指标符合DB63/T039要求，体质健康，无疫病，具有种用价值。
4.2 饲养管理
按照DB63/T547.1执行，补充优质蛋白质、维生素A、维生素E及矿物质，科学饲喂，适当运动，保持中等体况，配种前避免过饱。

5 供体羊的选择和饲养管理
5.1 供体羊选择
体型、生长发育符合DB63/T039要求，生殖机能正常，体质健康无疫病。
5.2 饲养管理
采胚前后按照DB63/T547.1执行，补充能量、蛋白质、维生素及矿物质，提供清洁饮水，保证中等体况。

6 超数排卵
6.1 时间
供体羊诱导发情第9天开始处理。
6.2 激素选择
促卵泡素FSH、促黄体素释放激素A3、氯前列烯醇PG、孕激素阴道栓CIDR。
6.3 方法
采用FSH多次注射法，先放置阴道栓，第9天开始每天间隔12小时逐渐减量注射FSH连续4天，第6针时注射PG，第7针取出阴道栓。剂量根据体重调整。
6.4 发情鉴定与配种
第12天进行发情鉴定，使用试情公羊，每20只供体羊配1只公羊，间隔8~12小时配种2~3次，每次配种后注射促排3号及维生素ADE并记录标记。

7 冲胚时间
配种后第7天回收胚胎。

8 准备工作
8.1 手术室要求
需在洁净手术室进行，面积大于15平方米，温度20℃~25℃，术前紫外线照射1~2小时。
8.2 供体羊准备
术前停食12小时，适量饮水。
8.3 术者准备
清洁消毒，穿戴手术服、口罩及帽子。
8.4 冲胚器械药品
包括液氮罐、手术保定架、恒温水浴锅、高压消毒锅、超声波清洗仪、容量瓶、电热鼓风干燥箱、体视镜、冲卵管等设备。