【地方标准】 猪圆环病毒3型聚合酶链式反应检测方法

DB37/T4047—2020
猪圆环病毒3型聚合酶链式反应检测方法
Detecting porcine circovirus 3 with polymerase chain reaction

前言
本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准主要起草单位：山东省农业科学院畜牧兽医研究所。
本标准主要起草人：李俊、时建立、彭喆、徐绍建、吴晓燕、刘畅、李琛、孙文博、于江、丛晓燕、韩红、吴家强、杜以军、陈智。

1 范围
本标准规定了猪圆环病毒3型（Porcine Circovirus Type 3, PCv3）的聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）试验方法。本标准适用于猪圆环病毒3型的快速诊断、检测。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法
NY/T541—2016 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

3 原理
聚合酶链反应或多聚酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR），又称无细胞克隆技术，是种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的方法。PCR由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。重复“变性—退火—延伸”三过程循环，经过25～30个循环后，理论上可使基因扩增10⁹倍以上。每完成一个循环需2min～4min，2h～3h就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

4 试剂和材料
4.1 水：GB/T6682，一级水。
4.2 蛋白酶K溶液（20mg/mL）：配制见附录A.1。
4.3 10%+十二烷基硫酸钠（SDS溶液，pH7.2）：配制见附录A.2。
4.4 Tris平衡缓冲液
4.5 三氯甲烷
4.6 无水乙醇
4.7 70%乙醇：配制见附录A.3。
4.8 0.5×TBE缓冲液：配制见附录A.4。
4.9 电泳级1%琼脂糖：配制见附录A.5。
4.10 DNA核酸染料。
4.11 DNA Marker 2000。
4.12 引物：
P1：5'-TACCACAGAAGGCGCTATGTCG-3'