【地方标准】 食用菌中农药多残留的测定 液相色谱-串联质谱法

DB65/T3638—2014
食用菌中农药多残留的测定 液相色谱-串联质谱法

前言
DB65/T3638—2014
本标准根据 GB/T 1.1—2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》的要求编写。本标准由新疆农业科学院农业质量标准与检测技术研究所提出，由新疆维吾尔自治区农业厅审核。本标准起草单位：新疆农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、新疆维吾尔自治区标准化研究中心。本标准主持起草人：孙、王成、刘圣红、赵了刚、古丽斯坦·阿不都拉、曹双瑜、周晓龙、塞丽滩乃提米告提、李瑜。
本标准的附录A为资料性附录。

1 范围
本标准规定了食用菌中农药多残留测定的原理、试剂和材料、仪器和设备、测定步骤、液相色谱-串联质谱测定、计算及精密度的要求。本标准适用于食用菌中噻虫嗪、吡虫啉、多菌灵、啶虫螨、除虫脲、灭虫螨、克百威、嘧霉胺、氟虫腈、辛硫磷、苯醚甲环唑、哒螨灵、阿维菌素残留量的测定，检出限均为 0.01 mg/kg。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 8855 新鲜水果和蔬菜取样方法

3 原理
食用菌样品中的农药经乙腈提取，经固相萃取氨基柱净化，采用液相色谱-串联质谱法测定，外标定量。

4 试剂和材料
除另有说明外，试剂均为分析纯，实验用水应符合 GB/T 6682 中一级水的标准。
a) 乙腈：色谱纯；
b) 甲醇：色谱纯；
c) 二氯甲烷：色谱纯；
d) 氯化钠（140℃烘 4h）；
e) 乙酸铵；
f) 固相萃取小柱（氨基柱，6mL，150mm，微孔滤膜0.20μm）；
g) 标准溶液：1000μg/mL，低温避光保存。
h) 标准工作溶液：取上述标准溶液根据需要用流动相配制成适当浓度的标准系列工作溶液，需现用现配。

5 仪器和设备
a) 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）；
b) 均质器；
c) 离心机：15000 r/min；
d) 旋转蒸发器；
e) 涡旋混合器；
f) 分析天平：感量 0.01g。

6 测定步骤
6.1 试样制备、保存
6.1.1 按 GB/T 8855 取食用菌可食部分，粉碎，装入密闭洁净容器中标记明示。
6.1.2 试样如不能及时分析，应置于 -18℃ 冰箱中贮存备用。
6.2 提取
称取制备样 15g（精确至0.01g）于 80mL 具塞离心管中，依次加入 5g 氯化钠、30.0mL 乙腈，用均质器中高速捣碎 1min，10000 r/min 离心 3min。准确吸取 10.00mL 上层乙腈相溶液（约 5g）于 150mL 平底浓缩瓶中，于 40℃ 水浴缓慢浓缩蒸发至近干。用 15mL 甲醇:二氯甲烷（体积比为 5:95）溶解样品，匀。
6.3 净化
氨基固相萃取柱可置于 150mL 平底浓缩瓶上（使用前用 5mL 上述甲醇:二氯甲烷活化该固相萃取柱）：将上述残渣溶液上柱，收集淋洗液，用旋转浓缩仪 40℃ 蒸发至近干，用甲醇:水（50:50）定容 2.5mL，过 0.20μm 滤膜，待液相色谱-串联质谱分析。

7 液相色谱-串联质谱测定
7.1 液相色谱-串联质谱条件
a) 色谱柱：Waters Acquity HSS T3 柱（2.1mm × 50mm，1.8μm）；
b) 流动相：A 为水，B 为乙酸铵溶液，梯度淋洗见表 1；
c) 柱温：40℃；
d) 送样量：5μL；
e) 离子源：电喷雾（ESI），正/负离子模式；
f) 扫描方式：多反应监测（MRM）；
g) 脱溶剂气（氮气）：650 L/h；
h) 辅助气（氮气）：50 L/h；
i) 参气（氩气）：0.18 L/h。
毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量等电压值应依最佳化；监测离子见表 2。

表 1 梯度淋洗表
时间/min | 流速 (mL/min) | A (%) | B (%)
0 - 3 | 0.20 | 95 | 5
3 - 5 | 0.20 | 95 | 5
5 - 12.5 | 0.20 | 85 | 15
12.5 - 12.8 | 0.20 | 10 | 90
12.8 - 13.5 | 0.20 | 95 | 5

表 2 被测物的母离子 (m/z) 和子离子 (m/z) 参数表
被测物 | 母离子 (m/z) | 子离子 (m/z) | 定量子离子 (m/z)
噻虫嗪 | 201.9 | 130.8, 174.8 | 174.8
吡虫啉 | 256.1 | 209.1, 174.9 | 174.9
多菌灵 | 192.0 | 132.0, 159.9 | 59.9
啶虫螨 | 223.0 | 89.6, 125.6 | 125.6
除虫脲 | 311.2 | 140.8, 157.8 | 157.8
灭虫螨 | 309.2 | 138.7, 155.8 | 155.8
克百威 | 222.1 | 122.7, 164.9 | 164.9
嘧霉胺 | 200.1 | 81.9, 106.8 | 106.8
氟虫腈 | 435.2 | 250.0, 330.1 | 330.1
辛硫磷 | 299.2 | 96.8, 128.9 | 128.9
苯醚甲环唑 | 406.3 | 110.9, 251.1 | 251.1
哒螨灵 | 365.2 | 309.2, 147.0 | 147.0
阿维菌素 | 895.6 | 327.4, 751.7 | 761.7

注：除氟虫腈为 ESI(-) 外，其余均为 ESI(+) 模式。
注：方法中所列色谱柱仅供参考，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他产品能有相同的效果，则可使用这些等效的产品。

7.2 液相色谱-串联质谱测定
按照 7.1 液相色谱-串联质谱条件测定样品和标准工作溶液，以色谱峰面积按外标法定量。在上述条件下，噻虫嗪、吡虫啉、多菌灵、啶虫螨、除虫脲、灭虫螨、克百威、嘧霉胺、氟虫腈、辛硫磷、苯醚甲环唑、哒螨灵、阿维菌素的参考保留时间 (min) 分别为 6.96、5.82、6.39、6.05、9.20、9.41、7.61、8.75、9.21、9.64、0.82、10.81 和 11.13。

7.3 液相色谱-串联质谱确证
按照 7.1 液相色谱-串联质谱条件测定样品和标准工作溶液，如检出的质量色谱峰保留时间与标准样品一致，并且在扣除背景后的样品谱图中，各定性离子相对丰度与在同样条件下得到的标准溶液谱图相比，误差不超过表 3 规定的范围，则可判定样品中有对应的被测物。

表 3 定性确证时相对离子丰度的最大允许误差
相对离子丰度 | 允许的相对误差
>50% | ±20%
>20%~50% | ±25%
>10%~20% | ±30%
10% | ±50%

7.4 空白试验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行。