【地方标准】 冬虫夏草中虫草酸的测定 液相色谱法

ICS：67.050 CCS：B04 西藏自治区地方标准 DB54/T0317-2024 冬虫夏草中虫草酸的测定液相色谱法 发布：2024-04-08 实施：2024-05-08 归口单位：西藏自治区市场监督管理局 前言 本文件按照GB/T 1.1-2020规则起草，由拉萨海关技术中心提出，由西藏自治区市场监督管理局归口管理。起草单位包括拉萨海关技术中心、西藏自治区农牧科学院农业质量标准与检测研究所、西藏自治区标准化研究所、福州海关技术中心及广州海关技术中心。主要起草人：王君、曹晓钢、王晓龙、王顺芝、魏娜、李继荣、扎西央宗、赵春艳、李二鹏、文艺、唐庆强、刘青、魏霜、席静。 1 范围 本文件规定了冬虫夏草中虫草酸的测定方法。 2 原理 采用液相色谱法。样品经水浸泡、超声提取，采用液相色谱分离，示差折光检测器检测，并以外标法定量。 3 试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为色谱纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 3.1 试剂 乙腈（CH3CN）：色谱纯。 3.2 标准品 虫草酸（C6H10O6，CAS:69-65-8）：纯度≥99.0%。 3.3 标准溶液配制 3.3.1 称取1.0 g虫草酸标准品于100 mL容量瓶中，用纯水定容至刻度，配制成10000 mg/L的标准储备液，4℃避光冷藏。 3.3.2 用流动相将储备液稀释成0、200、500、1000、2000、5000 mg/L的标准工作溶液，4℃避光冷藏。 3.4 材料 3.4.1 水相微孔滤膜：0.22 μm 3.4.2 塑料离心管：50 mL 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪，带示差折光检测器 4.2 超纯水仪系统 4.3 天平：感量为0.1 mg及0.01 g 4.4 离心机：转速≥4000 r/min 4.5 超声波清洗仪 5 试样的制备和保存 冬虫夏草样品去除泥沙至无肉眼可见杂物，自然风干，水分<10 g/100 g。研磨成粉末，通过60目筛子过筛，混匀后常温保存。 6 分析步骤 6.1 样品处理 称取粉碎混匀后的试样0.70 g于50 mL塑料离心管中，加水约15 mL，室温浸泡15 h或过夜，涡旋混合后超声30 min，于4000 r/min离心5 min，将水相转移至50 mL容量瓶中，重复超声步骤2次，将水相转移至同一容量瓶，用水定容至刻度并混匀。取适量液体过0.22 μm滤膜，待液相色谱测定。 6.2 色谱条件 色谱柱：糖类分离色谱柱，250 mm x 4.6 mm，5 μm，或其他具有同等分析效果的色谱柱。 柱温：30℃，流动相：乙腈+超纯水=75:25 (V:V)，流速：1.0 mL/min 进样量：10 μL 示差折光检测器池温度：35℃ 6.3 测定 待系统稳定后依次进样。用虫草酸标准系列溶液作标准曲线，依据样品峰面积和标准曲线计算样品中虫草酸含量。 6.4 空白试验 除不加试样外，其他操作与上述步骤相同。 7 结果计算 样品中虫草酸含量计算公式： X = ((c - c0) × V / m) × 10000 其中：X为样品中虫草酸含量（%），c为样品溶液中虫草酸浓度（mg/L），c0为空白溶液中虫草酸浓度（mg/L），V为定容体积（mL），m为样品质量（g）。