【地方标准】 鲜食玉米中直链淀粉和支链淀粉含量的测定双波长分光光度法

DB32/T2265—2012
鲜食玉米中直链淀粉和支链淀粉含量的测定双波长分光光度法
Determination of amylase and amylopectin content in fresh corn
发布日期：2012-12-28
实施日期：2013-02-28
发布机构：江苏省质量技术监督局

前言
本标准按照GB/T 1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的要求编制。本标准由江苏省农业科学院提出。起草单位包括：江苏省农业科学院农产品加工研究所、国家农业科技华东（江苏）创新中心农产品加工工程技术研究中心。主要起草人：宋江峰、刘春泉、李大婧、林美娟、刘春菊、吴海虹、牛丽影、崔莉、江宁。

1 范围
本标准规定了使用双波长分光光度法测定鲜食玉米中直链淀粉和支链淀粉含量的方法。本标准适用于乳熟后期至蜡熟初期收获的鲜食玉米中直链淀粉和支链淀粉含量的测定。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 7648—1987 水稻、玉米、谷子籽粒直链淀粉含量的测定
GB/T 6682—2008 分析实验室用水规格和试验方法

3 原理
根据双波长比色原理，若试样溶液在两个波长处均有吸收，则两个波长的吸光差值与溶液中待测物质的浓度成正比。在待测样品液中，直链淀粉和支链淀粉分别与碘生成络合物。通过分析这些络合物的吸收图谱，可以确定测定波长和参比波长。淀粉与碘能形成螺旋状结构的碘一淀粉复合物，具有特效的颜色反应：直链淀粉与碘生成纯蓝色复合物，而支链淀粉与碘依其分枝程度生成紫红-红棕色复合物。因此，这两种淀粉在与碘作用时会产生不同的光学特性，从而表现出特定的吸收谱及吸收峰。

4 试剂
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T 6682—2008中规定的水。
4.1 直链淀粉标准品
制备参照GB/T 7648—1987中附录A（参考件）操作。
4.2 支链淀粉标准品
制备参照GB/T 7648—1987中附录B（参考件）操作。
4.3 盐酸 (HCl)
4.4 氢氧化钾 (KOH)
4.5 石油醚（沸点30℃～60℃）
4.6 碘 (I2)
4.7 碘化钾 (KI)
4.8 碘试剂
称取2.0g碘化钾，溶于少量蒸馏水，再加0.2g碘，待溶解后用蒸馏水稀释定容至100mL。每天用前现配，避光保存。
4.9 直链淀粉标准备液
称取0.1000g直链淀粉标准品，置于50mL容量瓶中，加入1mol/L氢氧化钾溶液10mL，在热水中待溶解后，取出用蒸馏水定容至刻度，摇匀并静置，制备2mg/mL直链淀粉标准贮备液。
4.10 支链淀粉标准贮备液
称取0.1000g支链淀粉标准品，按（4.9）法制备2mg/mL支链淀粉标准贮备液。

5 仪器和设备
5.1 双光束分光光度计（带波段扫描）
5.2 分析天平（感量为0.01g和0.1mg，各一台）
5.3 pH计（精度为0.01，使用前校正）
5.4 索氏抽提器
5.5 恒温水浴锅
5.6 鼓风干燥箱
5.7 组织捣碎机

试样制备
将鲜食玉米籽粒样品用组织捣碎机捣碎，置于60℃鼓风干燥箱中烘干，使其水分含量降低到10%以下，过孔径为0.25mm试样筛。称取1g的烘干样品放入索氏抽提器中，加入35mL石油醚，加热回流脱脂4h，然后放入鼓风干燥箱中烘干，挥去残余的石油醚。

7 检验步骤
7.1 提取
准确称取脱脂样品0.1000g，置于50mL容量瓶中，加1mol/L氢氧化钾溶液10mL，在75℃水浴中充分溶解20min。冷却后用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，静置15min后过滤。
7.2 测定
精取5mL滤液，置于50mL容量瓶中，加25mL蒸馏水，以0.1mol/L盐酸溶液调pH至3.0，加0.5mL碘试剂，用蒸馏水定容至刻度。于室温静置25min后，以样品空白液为对照，用1cm比色杯，分别测定样品液入1、入2、入3、入4的吸收值A_in1、A_in2、A_in3、A_in4，得到△A_样直、△A_样支，再与标准化系列比较定量。
7.3 标准曲线绘制
7.3.1 选择直链、支链淀粉测定波长、参比波长，分别吸取1.0mL和5.0mL直链和支链淀粉标准贮备液置于50mL容量瓶中，加蒸馏水25mL，以0.1mol/L盐酸溶液调pH至3.0，加0.5mL碘试剂，并用蒸馏水定容。