【地方标准】 无菌（Germ-free，GF）猪微生物学监测技术规范

DB50/T10442020
无菌（Germ-free, GF）猪微生物学监测技术规范
Technical Specification for Microbiological Monitoring of Germ-free Pig
地方标准信息服务平台
发布日期：2020-10-10
实施日期：2020-12-30
发布机构：重庆市市场监督管理局

前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则编写。本标准由重庆市畜牧科学院提出，由重庆市农业农村委员会归口。本标准的主要起草单位是重庆市畜牧科学院，主要起草人包括葛良鹏、孙静、梁浩、刘作华、丁玉春、吴梦、黄勇。

1 范围
本标准规定了无菌猪生产及使用过程中的妊娠母猪、无菌猪、饮水和日粮、隔离器和物品等微生物学监测技术要求。本标准适用于无菌猪生产和使用时的微生物学质量控制。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB16551 猪瘟检疫技术规范
GB/T18090-2008 猪繁殖与呼吸综合诊断方法
GB/T18448.1-2001 实验动物体外寄生虫检测方法
GB/T18448.2-2008 实验动物弓形虫检测方法
GB/T18641 伪狂犬病诊断技术
GB/T18935-2003 口蹄疫诊断技术
GB/T21674-2008 猪圆环病毒聚合酶链反应试验方法
SN/T1559-2010 非洲猪瘟检疫技术规范
SN/T1919-2016 猪细小病毒病检疫技术规范
NY/T544-2015 猪流行性腹诊断技术
NY/T548-2015 猪传染性胃肠炎诊断技术
NY/T678 猪伪狂犬病免疫酶试验方法
NY/T679 猪繁殖与呼吸综合症免疫酶试验方法

3 术语和定义
下列术语与定义适用于本文件：
3.1 无菌猪 (Germ-free, GF) pig：利用现有检测手段，无可检出一切活的微生物（包括细菌、病毒、寄生虫）。指能保证猪源性细胞、组织、器官研究的生物安全性和清晰的微生物背景的实验用猪。
3.2 悉生猪 (Gnotobitoic, GN) pig：以无菌猪为对象，通过微生物移植技术构建出只含有特定菌群，并始终在可屏蔽外界微生物条件下生活的实验用猪。可分为单一菌株移植悉生猪和组合菌群移植悉生猪。
3.3 隔离环境 (Isolation environment)：与外界完全隔离，可阻断任何外源微生物侵入的封闭空间。
3.4 屏障环境 (Barrier environment)：屏障环境应作为隔离环境的第一层保障，用于放置和使用无菌隔离器。

4 妊娠母猪微生物学监测
妊娠猪应未注射猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗，外观健康，无异常。应排除经胎盘垂直传播的四种疾病，包括猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病、猪细小病毒病。病原筛查方法参照GB/T16551、GB/T18641、NY/T679和SN/T1919-2016执行。

5 无菌猪微生物学监测
5.1 采样
5.1.1 采样管的准备：宜采用螺帽盖的采样管，内部自带1支拭子。也可通过带螺帽盖的离心管和1支棉签自制而成。采样管的选择要求是在保质期内的、且包装完好的无菌采样管（宜经过环氧乙烷灭菌处理），或提前高温高压灭菌处理。采样当天，无菌采样管需放入屏障设施的传递窗内，并进行紫外光照30min及以上。
5.1.2 采样管转入隔离器：在保持无菌猪饲养隔离器传递通道内部密封罩密封状态下，首先取下传递通道外侧密封罩，将无菌采样管放入传递通道，并重新密封外侧密封罩。接着，采用1.5%-2%新制的过氧乙酸从传递通道外侧密封罩上的消毒孔，对传递通道内部空间进行喷雾消毒。醋雾时间不宜低于5min，密封消毒孔，并等待30min以上。随后，通过无菌猪饲养隔离器操作手套，从隔离器内部下传递通道内侧密封罩，将无菌采样管移入隔离器内，重新罩上传递通道的内侧密封罩。
5.1.3 采样过程：根据实验要求，用拭子采集样本（如猪肛门拭子、鼻拭子或粪便），样本采集后应立即装回采样管，并盖紧螺帽盖。
5.1.4 采样管转出隔离器：取下传递通道内部密封罩，将采样管转到隔离器的传递通道内部，罩好内部密封罩，再打（此段落原文不完整，按标准流程推测为完成转出操作）