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中华人民共和国卫生行业标准
WS/T 23—1996
尿中 δ-氨基乙酰丙酸的分光光度
测定方法
Urine—Determination of δ-aminolevulinic acid—Spectrophotometric method
| 1996-10-14发布 | 1997-05-01实施 |
中华人民共和国卫生部 发布
中华人民共和国卫生行业标准
尿中 $\delta$-氨基乙酰丙酸的分光光度测定方法
WS/T 23—1996
Urine—Determination of $\delta$-aminolevulinic acid—Spectrophotometric method
1 主题内容与适用范围
本标准规定了尿中的$\delta$-氨基乙酰丙酸($\delta$-ALA)的分光光度测定方法。最低检测浓度为 $0.3 \text{ mg/L}$。
本标准适用于正常人和接触铅工人尿中 $\delta$-ALA 浓度的测定。
2 原理
尿中 $\delta$-ALA 与乙酰乙酸乙酯缩合生成吡咯化合物。此化合物用乙酸乙酯提取，与对二甲氨基苯甲酸作用生成红色化合物，在波长 $554 \text{ nm}$ 处比色定量。
3 仪器
3.1 分光光度计，$10 \text{ mm}$ 比色杯。
3.2 具塞比色管，$10 \text{ mL}$。
3.3 离心机。
3.4 电炉。
3.5 聚乙烯塑料瓶，$100 \text{ mL}$。
3.6 尿比重计。
4 试剂
本标准所用试剂除另有说明者外，均为分析纯试剂。
4.1 实验用水：为蒸馏水或具有同等纯度的去离子水。
4.2 冰乙酸 $\rho_{20}=1.05 \text{ g/mL}$。
4.3 高氯酸，$\rho_{20}=1.67 \text{ g/mL}$。
4.4 无水乙酸钠。
4.5 对二甲氨基苯甲醛。
4.6 乙酰乙酸乙酯。
4.7 乙酸乙酯。
4.8 乙酸缓冲液(pH=4.6)：于 $700 \text{ mL}$ 水中加入 $57 \text{ mL}$ 冰乙酸(4.2)，$82 \text{ g}$ 无水乙酸钠(4.4)，溶解后加水至 $1\,000 \text{ mL}$。
4.9 显色剂：于 $30 \text{ mL}$ 冰乙酸(4.2)中加入 $1 \text{ g}$ 对二甲氨基苯甲醛(4.5)，$5 \text{ mL}$ 高氯酸(4.3)，$5 \text{ mL}$ 水，溶解后用冰乙酸(4.2)稀释至 $50 \text{ mL}$，混匀，存于冰箱中。
4.10 $\delta$-ALA 标准溶液：准确称取 $0.012\,80 \text{ g } \delta$-ALA·HCl，用水溶解后，移入 $100 \text{ mL}$ 容量瓶中，稀释
至刻度，此溶液 1 mL = 0.10 mg δ-ALA。再用水稀释成 1 mL = 10 μg δ-ALA 的标准应用溶液。
4.11 质控样：标准尿样、加标的模拟尿、加标的正常人混合尿或接触者的混合尿。
5 采样、运输和保存
用塑料瓶收集铅作业工人尿样 50 mL，尽快带回实验室（夏季运输时最好冷藏），测比重后，放 4 ℃冰箱可保存二周。
6 分析步骤
6.1 样品处理
6.1.1 分别取 1 mL 尿样于 2 支 10 mL 具塞比色管中，各加 1 mL 水、2 mL 乙酸盐缓冲液 (4.8)，混匀，其一为样品管，另一为尿样空白管。
6.1.2 向样品管中加入 0.4 mL 乙酰乙酸乙酯 (4.6)，向空白中加入 0.4 mL 乙酸盐缓冲液 (4.8)，充分混匀。
6.2 标准曲线的绘制
6.2.1 取 6 支 10 mL 具塞比色管，按下表配制标准管。
| δ-ALA 标准管的配制 | ||||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 管号 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| δ-ALA 标准应用溶液 (4.10), mL 水, mL |
0 2.0 |
0.1 1.9 |
0.3 1.7 |
0.5 1.5 |
0.7 1.3 |
1.0 1.0 |
| δ-ALA 含量, μg | 0 | 1.0 | 3.0 | 5.0 | 7.0 | 10.0 |
6.2.2 向各管中加入 2 mL 乙酸盐缓冲液 (4.8)、0.4 mL 乙酰乙酸乙酯 (4.6)，混匀。
6.2.3 于沸水浴中加热 12 min，取出冷却至室温。
6.2.4 各加入 4 mL 乙酸乙酯 (4.7)，加塞振摇 100 次，离心 5 min，静置分层。
6.2.5 各取 2 mL 乙酸乙酯提取液于另 6 支 10 mL 具塞比色管中，各加 2 mL 显色剂 (4.9)，混匀，静置 10 min，在 534 nm 处，用 10 mm 比色杯，以零管为参比测量吸光度。
6.2.6 以吸光度为纵坐标、δ-ALA 含量为横坐标，绘制标准曲线。
6.3 样品测定
取 6.1.2 条制备的样品溶液，按 6.2.3～6.2.5 条操作，测得吸光度后，将样品管的吸光度减去尿空白管的吸光度，从标准曲线上查出样品管中 δ-ALA 的含量。在测定前后及每次测定 10 个样品后，测定一次质控样。
7 计算
7.1 按式(1)计算尿换算成标准比重 (1.020) 下的浓度的校正系数 ($k$)。
k = \frac{1.020 - 1.000}{实测比重 - 1.000} (1)
7.2 按式(2)计算尿中 δ-ALA 的浓度。
X = \frac{m}{V} \cdot k (2)
式中：$X$ —— 尿中 $\delta$-ALA 的浓度，mg/L；
$m$ —— 样品管中 $\delta$-ALA 含量，$\mu$g；
$V$ —— 分析时所取尿样的体积，mL。
