【GA公共安全标准】 中毒检材中有机磷农药的定性定量分析方法

中华人民共和国公共安全行业标准GA/T101-1995
中毒检材中有机磷农药的定性定量分析方法
Qualitative and quantitative analysis methodsfor organic phosphorous pesticidesin case samples
1995-06-12发布
中华人民共和国公安部发布
1997-01-01实施
中华人民共和国公共安全行业标准中毒检材中有机磷农药的定性定量分析方法
Qualitative and quantitative analysks methodsfor organke phosphorous pesticidesin case samples
1主照内容与适用范围
本标准规定了中毒检材中有机农药的检验方法。GA/T101—1995
本标准适用于中毒案件生物检材中的敌敌畏，甲拌醇、内吸碎、乐果、甲基对硫磷、杀螺松、乙基对硫及其他化学结构相似的有机鼻衣药的定性定量分析，2引用标准
GA/T122—1995
毒物分析名词术语
3定义
本标准定文采用GA/T122—1995标准中定义。第一落气相色谱法
本标准需提供的检材有：中毒者的呕吐物，剩余食物，胃吸出液及中毒死亡者的胃内容物，胃组织、十二指肠内容物，血液、肺、肝及注射部位肌肉，以及现场收集的怀疑有农药的物证。4原理
本方法系采用外部质量控制的气相色谱的定性，定量分析方法，即检材与添加的阳性对照检材及阴性对照检材同时经过提取，净化及浓缩至一定体积后，用火焰光度或氧磷检别器气相色谱仪进行检测以RT值（绝对保留时间）或RRT值（相对保留时间）作定性分析。与平行操作的添加标准品响应值比较，以峰面积或峰高为依据，用外标法计算检材中农药含量。5试制（所有试剂均为分析纯）
5.2二氧甲烷
5.5己烷
5.6无水硫酸钠
5.7中性层析氧化铝，将市售中性层析氧化铝于130C活化3h，冷却后按6%比例加蒸增水搅拌均匀中华人民共和国公安部1995-06-12批准1997-01-01实施
后效回瓶内备用。
GA/T101-1995
5-8层析用活性碳：层析用颗粒活性蛋或酸洗层析用颗粒活性碳。（0.43微米粒度，或20~40目）5.9农药标准储备溶液：精确称取适量的各种有机磷衣药标准品，用丙酮配成每mL含10mg的溶液，作为储备液，置冰箱中保存。
5.10单一衣药标准使用液：将上述标准液用无水乙醇稀释至100倍，供GC分析用。置冰箱中保存，可使用半年。
5.11混合衣药标准使用液：取衣药标准溶液，用丙酮配制含不同农药浓度的混合标准。其适宜浓度为：敌敌畏25ng/μL：甲拌磷12.5ng/μL，乐果50ng/μL：甲基对硫磷50ng/μL：乙基对硫磷50ng/μL：杀螺松100ng/μLa
5.12氨基对硫磷标准品的制备：取1g左右工业品对硫磷溶于50mL乙醇：水（1：1）混合液中，遥勾后，移入100mL三角瓶中，加入25mL5mol/L锌粉，装上回流管，并在70~80℃水浴中回流1h，放冷，将上清液滤至分液漏斗中，用10%氢氧化钠溶液调成碱性，用蒸馏水稀至100mL左右，用30mL己烷提取二次，合并已烷通过无水硫酸钠脱水，稀至一定体积（经GC分析，氨基对硫磷保留时间小于对硫碍）该标准品用作测定体内对硫碍代谢物定性分析对照用。6仅器
6.1气相色谐仅：具有火焰光度检测器（或氮磷检测器）和色谱数据处理机。6-2电动振药器
6.3K·D浓缔器
6.4微量注射器：100.50,10.1L
6.5鼓璃净化柱（也可用50mL分液满斗代替）7操作方法
7.1定性分析
7.1.1提取
7.1.1.1取呕吐物、胃内容物.十二指肠内溶物各2~5g分别于蒸发血中，加无水硫酸钠研磨成干砂状。放入100mL分液漏斗中，加二氧甲烷或氯仿50.30mL各振荡提取15min，静置后，依次分别分出清液待净化用（如遇检验腐败检材中板性小的农药甲拌磷对硫磷，甲基对硫碎，杀松等，可使用萃提取，效果较好)。
7.1.1.2取血液5mL，绞碎肝脏5克，绞碎胃组织5克于蒸发皿中，加无水硫酸钠研磨成干砂状，放入100mL分液漏斗中，以下接7.1.1.1自“加二氧甲烷“起依次操作。7.1.1.3取尿液10~20mL置分液漏斗中，以下接7.1.1.1自加二氯甲烷起依次操作。7.1-1.4阳性对照及阴性对照样品制备及提取：取7.1.1.1至7.1.1.3相对应的空白样品两份：一份精确添加单一或混合的标准品农药各20～100mg作阳性对照：另一份作阴性对照提取方法同7.1.1.1至7.11.3.
7.1.2净化及浓缩
7.1.2.1装柱：取长约30cm，内径约1.5cm鼓璃层析柱（也可用50mL分液漏斗代替）。于底层松松塞上少许脱脂棉，依次加人无水随酸销2一3g，中性层析氧化铝5g（净化肝脏及胃等内脏组织需加10g）如遇有色素再加0.5g活性碳，项端加510g无水硫酸钠7.1.2.2净化：用与提取溶剂性质相同溶剂20mL淋洗装好的柱子，淋洗液弃去（注意淋洗时勿使柱中无水硫酸钠表层干酒）然后将7.1.1步的各试样提取液依次倒入各自的层析柱中，用层析柱活塞控制流速，以一滴接一滴流出净化液为宜，用三角瓶收集净化液，待第一次提取液将流完前，再倒入第二次提取液，待提取液流完后再用20mL提取落剂洗脱一次。2
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检材如为新鲜血液，因其中杂质较少，提取液可用滤纸过滤，不必过层析柱。如为腐败检材或油脂较多时，需先将提取液浓缩至2~5mL倒入柱顶，再用50mL落剂洗脱，或加大层析氧化铝用量。
7.1.2.3浓缩：将三角瓶中收集的净化液，移入K·D依缩器中，根据浓度大小可液缩至0.2~0.5mL。7.1.3分析条件（参考值）
色谱柱：玻璃柱内径3mm
检测器：火焰光度检测器（浓度低时可使用氮磷检测器）7.1.3.1分析条件
玻璃柱中装涂有1.5%0V-17和5%DC-200混合固定液的GaschromQ80~100目（或用60~80目chromosorbWAWDMCS担体）固定相柱温：210℃
检测器温：240C
汽化室温：240C
载气N，2.4kg(78mL/min)
燃气.H1.1kg(62mL/min)
空气10.35kg(150mL/min)
空气20.12kg(40mL/min)
7.1.3-2分析条件1
玻璃柱中装涂有2.5%QF-1和5%DC-200混合固定液的GaschromQ80~100目（或用60~80目chromosorbWAWDMCS担体）固定相柱温：200℃
检测器温：260℃
汽化室温：240℃
气.Nz2.4kg（(78mL/min）
燃气：H，1.1kg(62mL/min)
空气10.36kg（150mL/min）
空气20.16kg（48mL/min）
7.1.3.3分析条件［
玻璃柱中装涂有5%OV-210固定液的GaschromQ80~100o目（或用6080目chromosorbWAWDMCS担件）固定相
柱温：210℃
检测器温：250C
汽化室温：250℃
载气：N，60mL/min
燃气.H，100mL/minbZxz.net
空气1100mL/min
空气260mL/min
7.1.4检测
7.1.4.1进样
将各种检材提取浓缩液及阳性对照用添加已知标准品提取浓缩液及阴性对照空白组织提取浓缩液1一3uL注入上选任一条件色谐仅中，每十样品进样2一3次，并注射各单一标准品落液。7.1.4.2记录
分别记录各样品的保留时间（RT）值，填人GC定性分析结果表中（见通用标准），并记录添加标难3
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品和纯标准品在同样进样条件下峰面积值。7.1.4.3计算
计算标准品及各样品中各种衣药RT平均值，填人上述表中。计算添加标准品即阳性对照样品的回收率空白泰加农药中某一组份蜂面积（或峰高）平均值外标法回收率%一寻量琶知标准品表药中某一组份峰面积（或峰高）平均值X100
7.2定量分析
7.2.1提取
称取绞碎的检材（视检材情况）胃内容物，宵组织，血液，肝1～5g各2份（精确至0.01g）。另取相对应的空白一份于蒸发血或镜杯中，添加待测农药1至数种，每种含量，20.00至100.00μg（视检材中农药含量而定）。以下接7.1.1.1自加无水硫酸钠”起依次操作。7.2.2净化及浓络
按7.1.2依次操作。
7.2.3分析条件
按7.1.3GC三种分析条件任选一种，即采用与定性分析相同的条件进行定量分析。7.2.4检池
7.2.4.1进样
将两份检材提取浓缩液及一份空白添加标准品提取浓缩液分别进样，根据其含量每种检材进样1～3L，各进样23次。
7.2.4.2记录
记录检材及空白添加标准品峰面积值，并填入CC定量分析结果记录表，计算出各检材及添加的平均峰面积值。
7.2.5计算含量
AXmeXVXug
含量.W（μg/g）=
A.XV.XueXM
式中：A检材峰面积（峰高）平均值：A—添加标准品峰面积（峰高）平均值：Am一检材峰面积（峰高）平均值：m
空白添加标准品总量（Pg）：
检材浓缩至最后体积（mL）：
V-空白添加标准品液缩至最后体积（mL）微—检材进样体积(μL)；
ug—空白添加标准品进样体积（μL)：M检材重量(g）.
7.2.6计算相对相差
相对相差：（%）=区=x×100
式中：XX，为两份样品平行定量副定的数值。8分析结果评价
8.1定性分析结果评价
8.1.1回收率指标
当添加于空白样品中的标准品的回收率在60%以上，不管检材出现阳性或阴性结果均算可信：如添加于空白样品中的标准品的回收率在60%以下时，检材出现阴性结果，不能作否定结论，应重新操4
8.1-2定性必备条件
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如仅用GC分析法进行体内有机障衣药定性，必须使用两种以上不同极性的色谱柱或使用一种GC方法及一种TLC方法对体内农药.添加标准品农药及空白检材进行对照。检材中农药保留值与已知农药保留值一致时，空白又无千扰，才能得出背定结论。8.1.3代谢物鉴定
有机确农药在体内易代谢，如对硫瞬代谢为氢基对硫磷，应以代谢物标样进行比对，如还不能确定，应进行气相色谐一质谱法分析。8-1.4杂质辨认
工业品农药中毒.用GC分析体内衣药时，除出现农药主蜂外，也会出现杂质小峰，为防止误认为其它农药，在农药定性分析时，最好以当地衣药作对照。8.2定其分析结果的评价
两份检材在相同条件下所测出衣药含量，如两份之间相对相差不超过20%，说明该检材定量精密度是可常的，检材含量取平均值：如相对相差超过无许范围，应重作。第二篇薄层色谱法
9原理
本方法采用检材中的有机碍农药与空白添加标准有机磷衣药试样和空白试样同时经过提取，净化及浓缩至一定体积后，用薄层分析法进行分离及显色，与标准品比较以获得相同的比移值R，值作为定性分析的依据。
10试剂
10.1农药标准使用液：1mg/mL有机衣药溶液，供TLC分析用。配冰箱中保存，可使用半年。10.2环己烷分析纯
10.3石油醛分析纯
10.4硅胶G或硅胶GF
10.5二氟醒氧亚胺试剂，取0.5g的26-二氧醒氟亚胺溶解于100ml乙醇中。10.6漠
10.7溴酚兰试剂：取0.1g漠酚兰溶解于10mL丙酮中，再用1%硝酸银丙酮水溶液（丙酮：水=1：3稀释至100mL
10.85%酷酸液
10.91%间苯二酚无水乙醇液
10.105%氢氧化钠无水乙醇液
其它落剂及试剂同5.
11器材
11.1电动报荡器同6.2
11-2K·D浓缩器同6.3
11.3玻璃净化柱同6.5
11.4高效硅胶GF薄层板或自涂硅胶GF薄层板11.5层析红
11.6喷雾瓶
11.7电动吸引器
11.8微量注射器10pL.100L
12操作方法
同7.1.17.1.2
12.1提取与净化
12.2检测
12.2-1薄层板
高效醇层板或自制博层板。
12-2.2点样
GA/T101-1995
各种农药标准品点样35g·检材提取浓缩液适量点样。12.2.3展开剂
12.2.3-1己烷（或环己烷）：丙酮=4112.2.3.2苯：环己烷=41
12.23.3环己烷·氯仿=4·1
12.2.3.4苯：石油醚：丙酮=7*2*112.2.4显色
12.2.4.1含硫磷酸酯显色剂之.二氯醒氯亚胺溴法。展开后薄层板晾干，喷二氧配氯亚胺试剂至板均匀（高效板可用浸溃法显色），稍干，置滨蒸气缸中需2至5s，如有含硫磷酸酯农药存在.出现橙红至黄色斑点。12.2.4.2含硫磷酸酯显色剂之二：溴酚蓝——醋酸试剂法。将展开后薄层板晾干，喷溴酚蓝至板上出现均匀蓝色，在60C烘箱中加热5至10min，再喷5%醋酸溶液至背景呈浅黄色，农药斑点为蓝色。12.2.4.3敌敌畏、敌百虫显色剂：间苯二酚氢氧化销试剂，分别配制1%间苯二酚无水乙醇液：5%氢氧化钠无水乙醇液。
将展开后薄层板晾干，先喷1%间苯二酚无水乙醇液，再喷5%氢氧化钠乙醇液，或临用前等量混和上述溶液喷板，对板精加热后，敌敌畏，敌百虫显红色班点，背景浅绿色或无色，其它含硫有机磷农药不显色。
12.3阳性对照样品
根据阳性对照样品即添加于空白检材中衣药200pg+经提取.净化浓缩至0.5mL经点样10pL，同样将空白检材提取液点样10mL。如阳性对照样品出现已知农药斑点而阴性对照样品无干扰，说明衣药回收较好。如不出现衣药班点，说明农药回收率较低。13分析结果评价
13.1本方法仅作定性分析
13.1.1阳性对照回收估计
本方法阳性对照采用添加200pg农药于空白检材中，经提取浓缩至0.5mL，点样10pL，相当于4g。如不出现药斑点，说明回收率较低。此时，如检材未检出表药，不能作否定结论，应重作。13.1.2定性必备条件
作体内农药薄层定性，必须使用两种以上不同极性展开剂，并与标准品农药及空白检材进行对照分析。如检材中出现农药斑点的R值与已知农药斑点R均一致时，空白无干扰，可得出背定结论。如薄层分析为阴性，又不能排除农药中毒时，必须进行气相色谐分析。6
A1中毒症状
GA/T101-1995
附录A
有机舞类农药中毒诊断套考资料（参考件）
有机碑农药急性中幸的潜伏期，因品种、剂型和侵入途径不同而有差异。经口服中毒大多发生于0.5h内.短者10min，长者2h，敌敌畏最快，乐果最慢，死亡时间一般为1~5h，经呼吸道吸入时，一般30一50min出现瞳孔缩小，呼吸困难等症状。大剂量吸人高毒有机瞬可发生闪电式中毒或死亡，经皮肤中毒，一般4～6h出现症状。
有机瞬衣药的急性中毒症状大多与胆碱醋酶活性被抑制有关，可归纳为毒碱样症状，烟碱样症状和中枢神经系统症状。
胆碱酷酶抑制症状：
（1）毒碱样症状：乙酰胆赋誉积使副交感神经兴奋，同时交感神经节后纤维也兴奋，表现为恶心，呕吐、腰泻流诞，出汗，呼吸困难，紫，孔缩小，眼痛，视物模棉。（2）烟碱样症状：乙酰胆碱蓄积使横纹肌兴奋，表现为肌肉的纤维颜动，常从眼险，颜面，舌头开始，逐渐发展到全身空拿，最后转为肌无力或肌麻痹，尤其是呼吸肌麻痹可构成死因之一。（3）中枢神经系统症状：脑内乙酰胆碱积使中枢神系统由过分兴奋转为抑制。患者先头痛，眩晕，躁动，谱语，共济失调，呼吸加快，血压升高，体温升高，进一步发展为昏迷，惊既，血压下降，大小便失禁，因呼吸中框麻痹面致死亡。
典型的产重有机萨中毒的临床症状有由轻而重的发展过程，可分为初发生症状期，控牵期和麻病期。还由于毒物侵人迄径的不同，症状发生顺序也有所不同。吸人中毒时，瞳孔缩小，呼吸困难出现较早；经皮肤中毒时，最初中毒部位的肌肉纤维性颤动，并随着时间延长而加剧。在不太严重的情况下，仅出现中枢神经系统症状，瞳孔不一定缩小，呼吸困难不明显：口服中毒时，消化系统症状出现早，而后出现胆碱酯抑制的典型症状。
A2户体检验所见
不同品种的有机磷农药中毒所致的病理变化基本相同。急性中毒死者户检可见下述征象：A2.1户表观察户斑显著，呈暗紫色。户僵早而强，部分案例可见胖肠肌和脑二头肌显著牵缩，有的尚可见股四头肌、腹直肌等骨酪肌的率缩现象，尤以敌敌畏急性中毒户检例为多见。口唇及指甲青紫。据观察，大多数户检例睡孔缩小：少数则两侧睡孔也大小不对称；除经治疗者外，还有部分户检例睡孔不缩小，基至呈不同程度的散大，眼结膜有散在点状出血，口异周围有白色泡沫，部分病例可闻及有机磷农药的特殊气味，夏季可见死苍蝇在口周围粘着。A2.2消化系统口服大量有机磷中毒死亡的户检例，切开胃后可闻到有机磷衣药的特殊气味。有时可见黄色油状农药原减评于胃内容物液面上：有机碎剂与胃内容物混合可呈白色乳状液若口服少量高毒有机明衣药死亡或经洗胃，上述现象不明显。胃及十二指肠粘膜充血并有点状出血，敌敌畏等有腐蚀性的有机解衣药可使胃底粘膜呈大片灰白色腐蚀性损害。镜下见胃粘膜表层坏死，点状出血，粘膜下层充血，水肿。食管下段、十二指肠和空肠上段粘膜也可见类似胃粘膜的损害。大多数户检例胃肠壁平滑肌出现收缩波，以小星级行肌层较明显，肝显奢饮直，水肿，膜腺包膜下及间质可见灶性出血：因分记过度，肤腺腺泡上皮细胞内可见空泡形成。A2.3心血管系统右心房及右心室轻度扩张，右心室及静脉内充满暗红色流动性血液，心肌间质充血、水肿。
GA/T101-1995
气香及支气管腔内有多量白色泡沫液体，肺水肿多较明显，镜下见肺显著漆血，水A2.4呼吸系统
肿，有的还见灶性出血，部分户检例见细小支气管在幸性收缩，管壁肌层增厚，支气管粘膜形成皱壁向腔内案集，使在横切面上呈花边状。肺气肿区和肺不张区常相间存在。A2.5中枢神经系统软脑膜带血水肿，脑内小血管扩张淤血，呈明显脑水肿，部分户检例可见小突神经胶质细胞肿胀和小血管周围渗出性出血。有机磷农药对成人口服致死量
敌百虫
敌敌畏（25%乳剂）
对硫磷
甲基对硫碍
内吸磷
甲拌磷
马拉硫磷
10~20g
10~14g
5091-山
GA/T101-1995
附录B
有机磷农药GC分析图
参考件）
图BI七种在机霸农药分离图（条件→）feo
T0饿-需山
图B3七种有机霸衣药分离图（条件三）SOSE
图B2七种有机磷农药GC分离图（茶件二）农药
甲-1605
柔爆橙
Z-1605
条件一
2°55\
4°22\
条件二
案件三
4°48\
农药究
比移值R
展开剂
环己烷：丙配
莱·环己烷
苯·石油醚·正己烷
石油醚：丙酮
正己烷·丙酮·无水乙醇
8020:2
装：庚烷：丙醇
氧仿·丙酮
氯伤：两
苯：石油酵·丙霸
环已烧氧仿
石油醚：内霸
GA/T101-1995
附录C
有机磷农药薄层层析的比格值R
（参考件）
0.39o.550.72 0.07
0.640.270.480.420.56
0.400.880.50
0.460.600.790.130.30
0.900.950.950.100.68
0.630.550.240.25
0.520.650.700.72
0.680.970.34
0.830.920.470.920.81
0.980.980.900.980.970.900.420.960.950.950.950.950.98
0.980.970.95
0.480.970.980.960.980.970.980.980.980.980.100.800.89
0.840.960
0.830.950.89
0.950.910.400.42
0.370.620.570.550.090.30
0.950.840.40
附加说明：
GA/T101-1995
本标准由中华人民共和国公安部二所提出。本标准由中华人民共和国全国刑事技术标准化技术委员会归口。本标准由中华人民共和国公安部二所毒化室起草。本标准主要起草人徐婉、赵数真。
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