【地方标准(DB)】 鸡肝中金刚烷胺残留量的测定 液相色谱-串联质谱法

ICS65.020.01
备案号：21644-2008
江苏省地
方标准
DB32/T1163——2007
鸡肝中金刚烷胺残留量的测定
液相色谱-串联质谱法
Determination of amantadine residues in chicken liverLiquid chromatography-tandem mass spectrometry method2007-11-26发布
2008-01-26实施
江苏省质量技术监督局发布
为了有效控制离产品中金刚烷胺按的残留，特制定本标准。DB32/T1163—2007
本标准按GB/T1.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构利编写规则》和GB/T1.2-2002《标准化工作导则第2部分：标准中规范性技术要察内容的确定方法》编制。本标准的附录A为资料性附录
本标准日江苏省农林厅提出。
本标准由江苏省畜产品质量检验测试中心起草。木标准主要起草人：陆桂萍、朱永林、时勇、贡玉清、邵德佳、毕昊容、蒋天梅、吴琼、冯群科。1范围
DB32/T1163—20C7
鸡肝中金刚烷胺残留量的测定液相色谱-串联质谱法木标准规定了液相色谱-串联质谱法测定鸡肝中会刚烷胺残留量的原理、汉定方法，检出限，准矿度和精密度。
本标准适用于鸡肝中金刚烷胺残留量的检测，检出限为2.0ug/kg2规范性引用文件
下列文件中的条款逆过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本，凡是不注日期的引用文件，其最新版本造用于木标准。GB/T6682-1992分析实验室手水规格和试验方法3原理
试料中戏留的金风烷胺经液液获取后浓缩，周流动相落解。通过电喷雾离子化一重四极杆串联质谱以选择离了监测（SRf）方式进行检测。4测定方法
4.1试剂和材料
除特别注明外，本标准所用试剂均为分析纯试剂，水为双蒸水，符合GB/T66821992中-一级水规定。4.1.1金刚烷核标准品：纯度≥99%，4.1.2氯苯那敏标准品（内标）：纯度学99%。4.1.3甲醇：色谱纯。
4.1.4乙：色谱纯。
4.1.5正已烧
4.1.6异丙醇
一氯甲烷
4.1.82.5%乙酸水溶液
4.1.9氨一氟化铵缓冲液（pH11）：称取6.75g氯化铵溶于100ml浓氨水中。4.1.10溶液配制
4.1.10.1标储备液称取金刚烷安标准品10.0mg（精确至0.000.g），置于100ml容量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得。制或1001g/mL的溶液，作为标准储备液。置4℃保存。储存期为3个月。4.1.1C.2标准工作液精密吸取标准储备液1mL置100ml.容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀得到1.Cug/mL标准工作液，置4℃保存。储存期为1个月。4.1.1C.3内标溶液称取氯苯那敏标准品0.0ng（精确至0.0001g），置于100ml.容量瓶中用中醇溶解并稀释至刻度，摇勾即得。制成100ug/πL的溶液，作为内标储备液，置4℃保存。储存期为3个月；取适量储备液，用甲醇-水（50：50）稀释成1.0μg/1.的内标溶液。置4℃保存。储存期为1个月。4.2仪器和设备
4.2.1液相色谱申联质谱仪，配中喷雾离子源（ESI源）4.2.2子天平（感量0.0001:）
4.2.3勾浆机
4.2.4离心机（转速5000r/min以上）4.2.5氮吹仪
4.2.6旋涡混合器
4.2.7振荡器
4.3测定步骤
4.3.1试料的制备
DB32/T1163—2007
取绞碎后的供试样品，作为供试试料，置-18℃冷冻保存，备用，另取空白样品，绞碎后置-18℃冷冻保存，作为空白试料备用。
4.3.2提取
称取1g（土0.05g）试料，置于20ml玻璃离心管中，依次加入甲醇一水（50：50）200μl，内标溶液400μL，氨一氯化铵缓冲液（pH11）400μL，混匀：加提取液正已烷一二氯甲烷一异丙醇（2.0：2.0：0.1）5mL，涡漩混合1min，振荡10min，离心5min，分取上层有机相于另试管中：再加入提取液止己烷二氯甲烷一异丙醇（2.0：2.0：0.1）5mL，同法操作后合并上层有机相，丁40℃氮气吹干，残留物加入1mL流动相溶解，涡流混合，进行LC/MS/MS分析。4.3.3标准测定溶液的制备
称取空白试料1g（土0.05g）于20mL具塞离心管中，加入标准工作液（4.1.10.2）适量，同4.3.2步骤操作，得到适宜浓度的标准测定溶液，供测定。4.3.4测定
4.3.4.1色谱条件
色谱柱：Cia，150mmX4.6mm（i.d）：流动相：甲醇+2.5%乙酸水溶液（80：20）：流速：0.6mL/mim；
进样量：20μL：
柱温：20℃。
4.3.4.2质谱条件
离了源为中喷雾离子源（ESI源）：加热毛细管温度为320℃：
正离子方式扫描：
选择反应监测（SRM）：
碰撞气（Ar）压力1.2mTorr：
用于定量分析的离子反应分别为m/z152→135（金刚烷胺），m/z275—→230（氯苯那缴）。定性、定量离子及对应的碰撞电压见表1。表1金刚烷胺和内标物氯苯那敏的监测离子和碰撞电压日标化合物
金刚烷按
鼠苯那敏（内标）
注：*为定量离子。
母离子
子离子
碰撞电压
4.4结果计算和表述
4.4.1定性判断
DB32/T1163—2007
在相同试验条件下，试料中待测药物与会刚烷胺标准物质的保留时间一致，且监测离子相对于基峰的丰度比符合表2的要求，可判定该试料中存在金刚烷胺残留。表2试样离子相对丰度的允许偏差范围相对丰度
>20~50
≥10～20
4.4.2定量方法
充许侃差
金风烷胺安和内标氯本那敏在电喷军离子化（SI）方式，主要牛成+H准分子离子峰，分别为m/z152，275。选择性对准分子离子峰[M+H]进行二级质谱分析，金刚烷胺和氯苯那敏生成的主要碎片离子分别为m/z135，230，分别将其作为定量分析时监测的产物。以金刚烷胺定量离子与内标校工离子（表1）峰面积之比进行单点或多点校准定量，标准测定溶液和试料测定溶液中金刚烷胺的响应值均应在仪器检测线生范围内，色谱图参见附录A。按式（1）计算供试组织中金刚烷胺的残留量（ug/kg）：AXAIsXVsXC
式中：
试料中会刚烷胺的残留量，单位为微克/千克（g/kg）A
试料测定溶液中金刚烷胺定量离子色谱峰的峰面积试料测定溶液中内标校正离了色谱峰的峰面积标准测定溶液中金内烷胺定量离子色谱峰的峰面积标准测定溶液中内标校正离子色谱峰的峰面积标准工作液中金刚烷胺的浓度，单位为微克/毫升（色mL）标准工作液取用量，单位为微几（μL）试料的取样量，单位为克，（2）注：计算结果需扫除空白值，最终测定结果用平行测定的算术平均值表示、保留3位有效数字。5灵敏度、准确度、精密度
5.1检出限
本方法在鸡肝中的检出限为2.0uμg/kg5.2准确度
本方法在4.0μg/kg20ug/kg添加浓度水平上的收率范围为60%~120%。5.3精密度
本方法的批内变异系数≤15%，芯间变异系数≤15%（1)
附录A
（资料性附录）
金刚烷胺和内标的对照色谱图
金冈！烷胺和内标的对照色谱见图A.1RT:0.00-8.00SM1G
AA:124391385
AA23423225
AA:364393
AA:2021975
Time (min)
金刚烷胺和内标的对照色谱
DB32/T1163-—2007
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mVz-92.60-93 50 F*c.
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152DO@30.D
3.C5-135.131MS
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