【地方标准】 黑木耳液体菌种生产技术规程

ICS 65.020.20
备案号：58574-2018
辽宁省地方标准
DB21/T 2890-2017
黑木耳液体菌种生产技术规程
发布日期：2017-12-07
实施日期：2018-01-07

前言
本标准的编写原则是依据 GB/T 1.1—2009 给出的规程编写制定的。本标准由辽宁省农村经济委员会提出。本标准由辽宁省农村经济委员会归口。
本标准起草单位：辽宁友农业生物有限公司、沈阳农业大学。
本标准主要起草人：邹存兵，赵凯，范文丽，朱巍魏，张忠伟，张敏，陈飞，邓正正，王瑞景，唐志超，李颖，王维江，毕恺。

1 范围
黑木耳液体菌种生产技术规程
本标准规定了黑木耳液体菌种术语、定义及生产的基本要求，主要包括生产场地、厂房和布局、设施设备、生产工艺流程、质量要求、技术要求、生产记录与存档、菌种贮藏。本标准适用于黑木耳液体菌种的生产。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，仅所注明日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 12728 食用菌术语
GB 19169 黑木耳菌种
GB 150.1 压力容器
NY/T 731 食用菌菌种生产作业规程
NY/T 528 食用菌菌种检验规程

3 术语和定义
下列 GB/T 12728 界定的术语，以及下列术语和定义适用于本文件。
3.1 发酵罐：进行发酵培养的专用设备，也称发酵反应器。
3.2 罐压：指液体菌种培养过程中培养器内保持的空气压力，单位：MPa。
3.3 通风量：指液体菌种培养过程中每分钟通入培养基中的无菌空气的量。用 V/V（培养基体积/通入空气体积）标示。
3.4 接种量：指接入培养器中的菌种的数量，以菌种体积与培养基体积的百分比标示。
3.5 摇瓶液体种：指装在玻璃三角瓶内在摇床上恒温振荡培养的液体菌种。
3.6 初始pH值：指液体培养基配制灭菌后未接种时的pH值。

4 要求
4.1 技术人员：应有液体菌种生产所需的专业技术人员和检验人员。
4.2 生产场地、厂房和布局：符合 NY/T 528 规定。
4.3 设施设备：符合相关规定。高压灭菌锅和热汽锅炉应符合 GB 150.1 规定，并经政府有关部门检验合格。
4.4 总生产工艺流程：母种 → 摇瓶液体种 → 发酵罐液体种
4.5 培养基与母种
4.5.1 培养基：母种培养基使用附录 A 中 A.1 规定的马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）或 A.2 规定的综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基（CPDA）。液体种培养基根据黑木耳品种及当地原料的要求使用适宜配方（见附录 B），严格掌握初始 pH 值。
4.5.2 母种：母种继代培养后需按 NY/T 1742 规定抽样，并进行感官检验和菌丝微观特征检验，合格菌种进入生产流程。母种质量要求符合 NY/T 1742 关于母种生产的规定。
4.6 摇瓶液体种技术要求
4.6.1 培养基分装及灭菌：摇瓶液体种培养基装量应为容器体积的 1/4 至 1/3，分装后应立即灭菌。按常规高压蒸汽灭菌锅操作规程，在 0.1 MPa~0.12 MPa（121℃~126℃）条件下维持 25 min。
4.6.2 灭菌效果的检查：灭菌后的摇瓶液体种培养基于 30℃±1℃ 培养箱恒温培养 48 小时后，观察确认无浑浊、无异味，即可用于接种。
4.6.3 接种：严格按无菌操作程序，将母种斜面菌丝体切刮成 2mm~4mm 颗粒，移入摇瓶培养基中，每 100ml 液体培养基接种适量菌丝体颗粒。
4.6.4 培养条件：培养温度 26℃±2℃，转速 150~180 转/分。
4.6.5 培养期的检查：每日检查生长状态，及时检出浑浊、异味、泡沫异常的不合格菌种。
4.6.6 培养结束：摇瓶静置 1 分钟后，菌丝球体积比液体培养基体积的 45% 以上，可结束培养。
4.7 发酵罐液体种技术要求
4.7.1 空气过滤器检查：滤芯在额定风量下，对粒径 0.1-0.2μm 粒子的过滤效率在 99.999% 以上，空气阻力在 280 Pa 以下。所有材质应耐 126℃ 高温。使用前要拆分检查滤芯，要求无油污、无污物、无破损，外壳内外壁要求无污物、光亮洁净。
4.7.2 发酵罐检查与清洗：检查上全部阀门、安全阀、压力表要求完好，工作正常。对罐体内、外和全部阀门用流水进行冲洗，达到无死角、内壁无任何培养料残余物。