【商检行业标准(SN)】 培养基制备指南 第1部分:实验室培养基制备质量保证通则

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T1538.1—2005
培养基制备指南
第1部分：
实验室培养基制备质量保证通则Guidelines on preparation and production of culture media-Part 1: General guidelines on quality assurance for the preparalionof culturc mcdia in the laboratory(IS0/Ts 1l133-l:2000,Microbiology of lood and anirnal Ieecing stuffs-Guidelincs on prcparation and production of culturc mcdia-Part l:General guidelines on quality assurance for the preparationof culture mecia in ihe laboralory,MOD,2005-02-17发布
华人民共和国
国家质量监检验检疫总后
2005-07-01实施
SV/T 1538. 1—2005
1范围
规范性引月文件
3术读和定义
质量保证术语
培养基术语
测试菌株术语
培养苯质量控制
证期支件
培养基的实验室制备
培养基的使用
4. 5 培养基的弃置
5成品的质量控制
5.1 物理指标控制
5.2微生物指标控制
附录A（资料性附录）
附录B (资料性附录)
附录C（资料性附录）
食品和动物源性产品微生物分析标神中指定的培养其成分质控虚株的保藏和使用
培养基的质量保证一
常见可题解答
SN/T1538培养基制备南分为两个部分：第1部分：实验室培紧基制备质量证猫购第2部分;培养基性能洲试实用指南SN/T 1538. 1—2005
本部分为SV/T 1538 的第1部分,对成于1SO/1S［1133-];食品和动物饰料微生物学培养制备指南实验空培养基制备质量保证通则)）（2C00年英文版）。本部分与1S0)/TS=1133-1的-致性程度为修改采用，三要差异如下：按照汉语习實对一些编排格式送行了修改；将一些国际标准的表述方式政为适用丁我国标准的表述方式：对“前言”和\引言”进行了修政：除了原标准章“术语和定义”中的引用标准；在“规范性月文件”部分月ISO二9C09取代了IS08402，加人了标准B/T6682；将部分中提到的“特定国际标准\改为“特定标准”在2.4条款加人了特定的涅度值,如\4℃”、“20℃”等，在2.3.3中增加：『对称量税水培养基的祥述；在=.3.7.1中增加『对不同培养基灭菌的描述；在≥.3.7.3中对过滤器的组装条件进行了修改；在5中增加培养基弃置的解;
在5.2.5条款户加入了菌落计数技术；谢除了原标准守的汪解“1)”。本部分的附录A、附录 B和附录C均为资料性附录。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并力口本部分由中华人民共和国山西出人境恰验检疫后、中国检验恰疫科学砭究院负贡起草，本部分主要起草人：李卫华，赵贵明、张建军、廉慧锋、刘沛、巩红馥，本部分系首次发布的检验检疫行业标准。SN/T 1538.1—2005
微三物学实验室的十要工作是对各种微牛物进行保存、复苏、培养、检测利(或)数，所用的培养基应对样品和被测微生物都具有特示性，微兰物学分析程则要求培养基符介标准或满足最低性能要求，手保乱能够然得重现性结果，这样才能使分析结果雅确，叫靠。SN/11538培养共制务指南》龙微生物学实验空质量控制程序的一个必要组成部分，该标准能对境养基进行有效的监控：顾而保证结果的可后利有数性本部分是 SN/T 1538 系列标准哟第 1部分:规范了培养基相关术语，规定丁培养基贮存.制备、用,弃置等方面的通而要求，并提昌了故品培养基的质摔方法。范围
培养基制备指南第1部分：
实验室培养基制备质量保证通则SN/T 1538. 1—2005
本SV/T1538的部分规定「与培养基制各质量保证相关的通用术利食品或伺料微生物学分析月培养考的最低要求。
本部分适用一以下三种培养甚：商品化即用型培养基；
商品化脱水会成培养（包括完全培养和添补充物的苯础培养苯）；各别成分制备的培养基。
2规范性引用文件
下列文件用的条款通过SN/T15本部分的引用而成为本部分的条款、凡是注期的引用文件，其随斥所有的修救单（不包括期识的内容)或修订版均不适用三本部分，然而,鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本，凡是不注口期的,用文件，其最新版本适用于本部分。G13/T6682分析实验室用水规格和试验方（cqV1SO3696：1987）GB/T1000质量管理体系基础和术语（iTSO9002000）LV 1659体外诊断方法—
-微牛物培养基——术语和义
EV12322位外诊断医疗设备微生物培养基培养基性能标准3术语和定义
下列术语和楚义适用三SN/T1538 的本部分。3.1概述
本条款规定与质量保证相关的通用定义以及与培养基和质控菌株相关的术计。3.2质量保证术语
质量保证
quality assurance
为使人们能确信呆个产品或服务能满是规定的质量要求所必然的在质量体系中效行的全部有计划和系统的活动。
质量控制quality control
为达到质量要求所英最的操作技术和活动。3.2. 3
internml quality control
内部质量控制
与控制分析和必要的纠偏活动相关的实验室制备工作的连续控制计划。3. 2. 4
培养基批量batch of cultue media;lot of culture media是培养基完整的可追溯单位。是指浅足产品要求(内部摔制)和质量保证测试，产品型号和质量稳定的·定量的半成品或成品。这些产品在特定的牛产周期生产，而且编号相同:
SN/T 1538. 1—2005
培养基的性能performance of culture media在等定条件下培养基对测试菌株的反应。3.3培养基术语
培养基culturemedlium
液体、兰再体或回体形式的，含大然或合成波分，用丁保证微兰物繁殖或保持其活力的物质。注：当与其润组戎间丝附，这个术语常被缩写为“medliun\。（例如，“anrichmcntmcdium\为增菊培养基）3.3.2按化学成分分类
3. 3.2. 1
chenmically defined cultnre mediun纯化学培养基
！含有化学成分的培举基（即分了构和纯度已知）。3. 3.2.2
非纯化学培养基
cheinically incompleteculture mdiun全部或部分山天然物质，加工过的物质或H他不纯的化学物质构成的培养基。注：IS(O/TC 34/SC:9中刘培养基中使用药各科不纯的化学物质送行了详细的描述和命名,参附录 A,3.3.3按状态分类
3. 3. 3. 1
液体培养基liquidl ulture mcdiuir一种或多种成分组成的水溶液（如：蛋白陈水.营养肉汤等）、注1：孤要将本频粒加到液体培养基中，江2：品管、一鱼瓶或瓶子中的被休培养“殷称作：“肉汤”。3. 3. 3.2
固体培养基和半固体培养基solid culture medium and semi-solid culture mediun含有小同浓度固化物(如:琼脂、明羧等)的液位培养基。注1：琼脂作为匿化物的培养茎在各国应用广泛，日前迈带用缩略语\琼脂”作为这种固体培养基的同义词。它可以和其他名词接独!。妇“平板计数琼唱”。注2：谢注到平亚内的固体培养基一般称之为“平板”·倒人试管并摆放成亲面的面体培养基，当培养基凝固后通常称作“面”。
3.3.4按用途分类
3. 3. 4, 1
运输培养基
transportmediun
在敢样后和实验窄样品处埋前保护和维持微牛劾活性的培养。注：运输培养基中通常不充许包含使微牛物的增殖的赖质，但是培养基成能保扩菌殊殖保们变废（如：srlart运输培养基或Arie\运输培养基）。3. 3. 4. 2
保藏培养基
preservation medium
而工齐一亲期限内保护利维接微牛物活小，随止长保存对微牛物的不利影响，或使物在长斯保存后容易复亦(如:13o:sc素培养术)的培养基。3. 3. 4. 3
复苏培养基
rcuscitafionmxdiun
能够使受损或应邀的微烂物修复，使微牛物恢复止常烂长能力，们不·定促进微牛物繁殖的培养基。
3. 3. 4. 4
增菌培养基enrichmentnedium
大多为液俗培养基，能够给瑕生物的繁殖提供特定的生长环境，3. 3. 4. 4. 1bzxZ.net
选择性增菌培养基selective enrichment mediumSN/T 1538. 1—2005
能够保证特定的微生物在H繁殖，而部分或全部抑制H他微生物生长的培养基（如：RsppaportVessiliads培养基）,
3. 3, 4, 4. 2
非选择性增菌培养基non-selectiveenrichnentmedium能够保证大多数微生场生长(如：营养肉汤)的培养考，3. 3. 4. 5
分离培养基isnlalinnltedium
支持撒生物生长的固体戎半固体庞养。3. 3. 4. 5. 1
selcetivc isolation incdiunr选择性分离培养基
支持特定微牛物的牛长而抑削其他微牛物牛长的分离培养基如：PALCAM娠脂、MarCenisey脂)。
3.3. 4, 5.2
非选择性分离培养基nn-selective isilation medium对微生物没有选择性抑制的分离培养基（如：营养琼脂）3. 3. 4. 6
鉴别培养基differentialinediun能够进行项或多项微牛物牛理和(或)牛化特性鉴定昀培养基(如尿素培养基、Kligler琼胎)。注：能够,而丁分离培养的鉴剂培差基被称作为分离和(或)别培养基[如木糖赖氨酸脱氧胞盐(XLD)琼脂]3. 3, 4, 7
鉴定培养基
identification medium
能够产牛生一个特定的鉴是反应而不需要进“步俏认实验的培养需。注：用}分离的鉴定培养基被称为分离和（或)整定培养基、3. 3. 4. 8
media having multiple uses
多种用途培养基
同时可归为几类不同用途的特定培养基，例如，按3.3.4.3分类，血琼脂是一复苏济养基；按3. 3. 4. 5分类为分离培养甚;按 3. 3. 1. 6 分类为鉴别培养,用于溶血的检测。3.3.5按制备方法分类
3. 3. 5. 1
即用型培养基rcady-to-usc:maxdiunr以归用形式置于容器(例如：平且、试管或其他容器)供应的培养基，3. 3. 5. 2
商品化脱水合成培养基culture medium prepared from commereially dehydrated formulations不立即使尼剂干粉形式的（如；粉末、小颗粒、冻干等形式)语养基。这类培养溶于水而能制成下列磨养苯：完全即用型培养基，
不究全即用型培养基，使用到需加人不稳定成分，3.3.5.3
实验室制备各别成分培养基culture merliunprepared from inudiviclual comxonents in thelaboratory3
SN/T 1538. 1—2005
3.4测试菌株术语
3.4.1概述
测试菌株滑指用于培养基质量控制和性能测定的微生动。根据月途不同定义如下：3.4.2
标准菌株referencestrain
至少定义到属或种水平的医株，按株特性进行分类和捕述，最好有明确的亲源。3.4.3
标准储备菌株
referencestocks
将实验室分离到的或供应商提供的标准菌株转接一代后得到的一套完全杆向的独立蓄株3. 4. 4
工作菌株Workingculture
由标谁诺备菌棵转接一代蒸得哟菌淼，4培养基质量控制\
4. 1证明文件
4.1.1生产企业提供的文件
生产企业应提供下列材料：
培养基、独文成分.添加成分名称及产品编弓；批号：
培养基使用前的?H；
储藏信息和有效期；
性能评价和所用的测试菌株，
技术数据清单：
质控证书；
必要的安全/危害数据。
4.1.2实验室检查记录单
实验室改到培养基后，应检查：培养基的名称和批号；
接改且期；
有效期：
色装及其完整性。
4.2贮存
4.2.1概述
严格按赔供造商提供的贮存系件，有效利便用方法进得培养基的保存和使月4.2.2脱水培养基及其添加成分的质量管理和质量控制新离买的培养基一般为脱水的粉状或题粒状,保存在密的容器中，用于菌种选择或鉴定的添加成分通常为冻：物或液体：培养基的购买成有计划，以利于存货的周转（即掌握无购无用的凉则）：实验室应保存有效的培养基口录单，清单应包以下内容：容器密闭性复查；
首次于封日期：
内容物的感官检查，
[）增养基质量常见问题意见谢效（。SN/T 1538. 1—2005
对丁新开过的脱水培养基，应刘其质量进行检查。通过粉末的流动性、均勾性、结块情说和色泽变化等判渐脱水养基的质量的变化：若发现培养基受潮或物埋性状发牛明品改变则不应再使用，4.2.3商品化即用型培养基
成严格按照供成商提供的吗行条件，有效期和使用方法逊行保行和候用。4.2.4商品化的脱水合成培养基和各别成分制备的培养基这奖培养基的贮存有效期各不相同，-般无法做统-规定。可参照不同标准户的规定执行。培养基火菌后分装筠平皿，试管或测试瓶户，不个能立即使用的培养基应避光、十燥保存。除等殊亲明利标准视定，道常情况下基码培养基（如使用能加人添成分的培养基)应在4℃冰籍中保存不超过3个，或在温（20)下保存不超过1个月，以保证H成分不会改变：不稳定的选择证物质和其他添训成分应即配即用;对发牛化学反应或含有不稳定成分的体培养甚也应即亞即用，不可三次融化，
鸡察培养基颤色变化足有蒸发/脱水情况，足否有徽生物兰长。当培养基发生这类变化时，应禁正使用
使用利进一步加热前，应事先将流获基放置到室湿，4.3培养基的实验室制备
4.3.1概述
使用脱水培养基和其他含有有害物质（如舶盐或H他选泽剂）的成分封，应遵守良好实验室期范和牛产厂商提类的使用说明。
使川商品化脱水合成培养基制备培养基时，应产格接照！商提共的使利说肌配剖。如质品休积，PH、制各条件、灭条件和操作让骤等。使用各别成分制备培养基时.应按配方准确配制，记录2.1.2列出的内容：并记录所使用成分的特性（如代号和批号等）
4.3.2 水
配制培养基应使而蒸馅水或柜同质员的水，以排除阅试条件下抑制或影响微生物生长的物质。如果燕耀水是用氯消毒的水制备的，在蒸馏前应允刘氯逆行巾和（见GB/T6682）。盛放蒸馏水的穿器最好是由性材料制成的（如吓性玻璃、聚艺烯等）.在初次使用前要确认容器Ⅲ不含有征:何抑制因子。
汁：有时需使用新制备的燕褶水，避免水心溶蟹的“氧化候。保江蒸箱水的质量蒸超水的电险率最少减达到30普告：英用离子交换器（去离子)生产的去离子水，微生物含量较高，这税水在过滤灭菌后仍可能带有细菌生长的抑制因子。所以配置培葬基时最好不要使用这种方法生产的去离子水,而应使用蒸馏水。4.3.3称量和复水
称量所需量的脱水培基（注意缓慢操作，必要叫佩带口罩或在通风框中操作，以吸人含有有物质的培养基粉末）光加人少量的水，充分混合汗意避免培恭基结块）然后乃加水牟成需的，4.3.4溶解和分装
脱水培养基加水后适当圳热，并不停搅卦使其快速溶解，必时，重新溶解。含墩脂的培养基在巩热前应先浸泡几分锦。用各剂成分制备的培养本应将不同成分分别训人适量的水中，并充分溶解，然后再加水全新需的量，
4.3.5pH的测定和调整
用>H计测pH,必要服逊行调整。在实验究用各别成分制备的磨养基,除特殊说外，培养基灭菌后冷却到2℃时I1的变化不应趋适0.2个单位。一般使用浓度约为0g/1（约110l/.)的氢氧化钠溶液或浓度约为36.5 g/1(药r:o1/1.)的盐酸溶液调整培养的pH。注：商寻化药培养是高玉天留前后PII可能受化很人。但采月优质燕播水或云离了求配时，灭菌前无带调节SN/T 1538. 1—2005
PH直。
4.3.6分装
将虹制好的培养基分装到适当的穿器中，根据不同用途，究器的体滨可为培※基的1倍、2倍或3筛。
4.3.7灭菌
4. 3.7.1概述
培养席和试剂应来用湿热灭菌(4.3.7.2)或过滤灭菌(4.3.7.3)。亮绿培举基等特定的培养基中含有对光和热敏感的物质，！能点沸灭菌。然沸后应迅逆冷却，避为保存；明胶，血清、糖类等不耐高温的物质，应采用高压锅低温灭菌法/问欧灭菌法灭菌；有些试剂则不需灭菌，可直接使用（参见关标准或供应商使用整明）。4.3.7.2湿热灭菌
趾热灭菌在高一勒或制备培养荒的容器中逃行，高出火菌一般采用121火菌15 min。当培养体积超过1000IⅡL时.要对火菌条件逃行适当的调整·们应按照标准或使用说明的魂定逃行。产压火菌过程要薄过放置到特庭使箐的热电稿惑测试条进行蓝测·以保证灭菌的效果：注：大容中(0m[)的培养基灭菌时可能会造成过度热。灭菌效果的控制是关键。加热户采用适当的方法冷却，以防加热过度。这对于肠道菌培养基利人容器中的培养共等的次菌十分重要，4.3.7.3过滤灭菌
过德火菌时在克空负乐或正压的条作下进行。使用孔径为0.22m的滤膜和过滤垫。过滤前为将滤膜和惑垫灭菌，过滤器于121℃灭菌151i=（可以整体灭菌也可以拆卸后灭菌），灭菌后在无菌条件下组装。
注：-些滤膜上对若有聋口(如抗生烹)。为达到有效过法,应事完游滤膜用无畜水润泥：4.3.7.4监测
应对经混热或过滤灭菌的培养基进行监测，尤其要对[H、色泽、灭菌效果和均句度等指标进行监测。
4.3.8添加成分的制备
制含有有毒物质的添加成分（儿具是抗生素)时应小心操作（必要时在通风柜中操作），避免因粉未的护散造我实验人负过敏或发其他不良反虚；制备率液时随小心按产品使用说明操作；不要使用过期的试剂；抗小素工作溶液应现用现配；批量配制的抗牛索液分装后冷冻矿存，怎解冻后的贮存溶液不能冉饮冷冻；厂商应提粪冷瓷对抗牛索活性影均的有关资料，也可由使用者与行测定，4. 4培养基的使用
4. 4.1琼脂培养基的融化
将培养基放到沸水浴中或采用有相同效果的方汰（如高乐锅中的蒸汽)使之融化。经过高压的培养基应尽量减少函加热时问，避免过度加热、培养基融化后放人47℃2℃的恒温水浴锅保湿，直个使月。融化后的缔养苯应尽快使用，放骨时间殷不成超划4h。4.4.2培养基的脱气
必要时，将培养在使用前放到沸水浴然汽浴热i，训热时松于容器的盖子；如热后盖紧，关迅速冷却至使而温度。
4.4.3添加成分的加入
对热不稳定的添加成分应在培养基冷却至47℃：工2℃时再加入：灭蓄的添加成分在加人之前，应先救置劲室温，避免冷的液俭造战踪脂凝结或形成片状物，将加人添加成分的培养基缓慢充分混匀，尽快分装到待用的容器中。
4.4.4平板的制备和储存
倾汁融化的培养基平牛-使之在平血形成一个垒少2 mm厚的琼脂层(直径s0 rmrm 的血SN/T 1538. 1—2005
通常要人m境瞻培养本。将平血盏好血盖后莜到水乎平面使境脂冷划凝固。注：在培养过程中，培养居会损失水分。当水分损失的量人于培养总益的1%时，就会影响微牛物的牛长。造成培养基求分损尖的固素很多·如培养基成分，平π中培养基总量和培养箱的※型等如如月带风扇的培养箱增养箱中的壶度偏任，平板在培养箱中放置的位置靠近加热管，培养温度过高等）,操作时应汁意避免。凝回后的语差集应立即使用或存放丁暗处和（或)℃2℃冰箱的密封袋中,最多存放一周或按厂商提供的标准效行。在平板底部做好标记，标记的内容包括名称、剃备日期和（或)有效期。也可以使用适宫的培养基编码系统进行标记，将倒好的平板放在密封的嬰二中冷藏保存叫诞长贮存期限。为了避免产生冷凝水，平板应冷却后再装人袋中。贮存前不要对培养基表面送行十燥处理。对丁采而表面接种形式培养的固沐培养基，应先对琼脂表面进行干燥：揭正平血盖，将平板倒扣下烘箱/培养箱中（温浸设为2%~50C）；或放在有对流风的无圆净化台中，占到培养其表面的水滴消失为止。注意不要过没下燥。商业化的平板惊脂培养其成按照厂商提供的流明使用。4.4.5培养
培养时每哚最多萍放六个板，板间安留有空隙以保证空气流逆，使培养物的温度尽快与培养籍温度达到一致：被体培养基温度与培养箱达到一致取决于很多因素，如沐积，内穿物量,容器类型、培养类型等；使用厌氧灌时，摊放的板数可以超过六个。4.5培养基的弃置
所有污柒和未使用的培养基的亦置应采用安全的方式，并Ⅱ要符合相关法得法舰的规定，注：应根据关法律法规和标准的要求以&各实验室的实际情况，在诞剖定的药品试剂安全普理规范当中加人有关增养基治学的其体要实，以保所作曾增养基的安全性。5成品的质量控制
5.1物理指标控制
培养基的实验室测试个少应包括：20℃~25℃的pH值；
并应观察以下内容：
加人语系基的量，谅脂层的序度；色泽：
透阴度和(或)是含存在肉眼可死的杂；凝胶意定性、黏调度和泥度。
5.2微生物指标控制
5.2. 1 污染的控制
从每批制备好的培养毕中选取部分样品进行污染测试。5.2.2测试菌株
颜试菊株是具有其代表和的稳定特性并能有效证听实验宰特定培养甚最佳性能的一套菌株：测试菌株主要购置丁标菌种保牛心，适可以是实验室白已分离的点有良好特性的菌株。实验室应检和记录标谁储备菌株的特性；新复亦的菌株可能公有非特异性反应，使用封应引起注意：最好使用从食品分离的菌殊，
每种培养基的测试菌棕应包话：其典型反成特性的强阳性菌株；薇弱生长的阳性菌株(对暗养基中选择剂等试剂敏感性的菌殊)：非特异烂菊株。如：产生不同发酵反应和荧光反应的菌株;阴性菌恢。
SN/T 1538. 1—2005
注：国际食品微生物委员会(ICFM)和培养基菊殊二生工作(WPCM)介绍了培养基评估用测试菊长的有效收案方法。
5.2.3即用型培养基和试剂
商品化即用型培养的生产厂如果经过IS09901体系认证或满足柜应质量要求，应向债用方提供相应的资质明。这样，使用者就不必再进行大量的培养举测试1作，但应保证培养的贮存条件。5.2.4商品化合成脱水培养基制备的培养基对存批制备好的培养基除用标准菌殊进行测试,还应月实际栏品进行检测，以更好地保证培养基的质量。不含指示剂或选泽剂的培养基，只需用阳性萧株追行检测；含有指示剂或选泽剂培养基·应使同能证期乓指示或选择作用的株逊行试验;复合培养基（即需要加人添部成分的培养基)需装用具备5.2.2性能的菌株逐批过行验证；实验空制备的带机入添加成分的即用型培养共本条款同样适用。5.2.5各别成分制备的培养基
除了按照5.2.条款进行流养基菌殊测试外，还应对各别成分制备的培养基用Miles&Mista技术,螺旋平板技术或菌落总数技术进行测试，以监萃基础材料的质，培养基的性能和实验室内部的配制规范。
注：以二足最循要求。如果食召只含有受拯的微生物细驱，还迹为虑培养基在受微生物恢复方的逅用性。南殊保存、传代技术和标准莹株的汝集餐见附录3。8
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