【地方标准】 包装饮用水中铜绿假单胞菌快速检测 胶体金免疫层析法

DB34/T4878—2024 包装饮用水中铜绿假单胞菌快速检测胶体金免疫层析法
Rapid detection of Pseudomonas aeruginosa in packaged drinking water-Colloidal gold immunochromatographic assay

前言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
注意：本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由安徽省产品质量监督检验研究院提出。
本文件由安徽省市场监督管理局归口。
本文件起草单位：安徽省产品质量监督检验研究院、安徽省食品药品检验研究院、安徽蓝蓝矿泉水有限公司。
本文件主要起草人：陈赵然、姚帮本、郭佳佳、吴基杰、郑健、陈伟、闫超、刘玉军、童宁、朱双四、徐建国、叶应旺、张居舟、程潇、郭佳、孟宪卓、周裔彬、祝红蕾、张静、姜采妮、候永成、陈方圆、徐丽娜、章颖、谢晶、郭婷。

1 范围
本文件规定了包装饮用水中铜绿假单胞菌的胶体金免疫层析快速检测方法。本文件适用于包装饮用水中铜绿假单胞菌的快速检测。

2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB 8538 食品安全国家标准 饮用天然矿泉水检验方法

3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。

4 原理
样品中的铜绿假单胞菌经滤膜过滤富集，超声处理提取DNA，以此为模板，设计经异硫氰酸荧光素（FITC）和生物素（biotin）修饰的上下游引物，通过聚合酶链式反应（PCR）得到扩增产物。扩增产物的FITC端与胶体金上的FITC抗体结合，biotin端与试纸条检测线（T线）上的链霉亲和素（SAV）结合，导致T线颜色加深，通过对比T线与控制线（C线）的颜色，对样品中的铜绿假单胞菌进行定性判定。

5 试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯。
5.3 三羟甲基氨基甲烷（Tris）
5.4 浓盐酸（HCl）
5.5 乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na·2H₂O）
5.6 氢氧化钠溶液（NaOH）
5.7 Tris-HCl溶液：称取Tris（5.3）6.06g，加水溶解，调pH至8.0，加水定容至50mL。
5.8 EDTA溶液：称取EDTA-2Na·2H₂O（5.5）9.306g，加水35mL，充分溶解，用NaOH溶液（5.6）调pH至8.0，加水定容至50mL。