【地方标准】 副猪嗜血杆菌对替米考星的敏感性检测

DB42/T1679—2021 副猪嗜血杆菌对替米考星的敏感性检测地方标准 发布：2021-05-12 实施：2021-07-12 发布机构：湖北省市场监督管理局 前言 本文件按照 GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》起草，可能涉及专利，发布机构不承担专利识别责任。本文件由华中农业大学提出，由湖北省农业农村厅归口管理。起草单位包括华中农业大学、武汉科维安检测科技有限公司。本文件主要起草人包括郝海红、袁宗辉、赵俊龙、黄玲利、王玉莲、陈冬梅、陶燕飞、彭大鹏、王旭、潘源虎、贺兰、谢书宇、程古月、瞿玮、蔡旭旺、徐小娟、张朋。实施应用中的疑问可咨询湖北省农业农村厅，电话：027-87665821，邮箱：hbsnab@126.com；意见反馈请联系华中农业大学动物科技-动物医学学院，电话：027-87287140-8115，邮箱：haohaihong@mail.hzau.edu.cn。 1 范围 本文件规定了副猪嗜血杆菌对替米考星的体外敏感性检测方法，适用于兽医临床分离菌株的敏感性检测和治疗指导。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款为本文件必不可少的内容： - GB/T 34750 副猪嗜血杆菌检测方法 3 术语和定义 本文件无需界定额外术语。 4 仪器和设备 4.1 冰箱：2℃～4℃和-20℃。 4.2 恒温培养箱：37℃±1℃。 4.3 电子天平：感量0.00001g、0.001g、0.1g。 4.4 微量加样器：1μL～1000μL。 4.5 显微镜。 4.6 台式冷冻离心机。 4.7 细菌多位点接种仪。 4.8 生物安全柜：II级及以上。 5 试剂或材料 5.1 替米考星标准品。 5.2 无支原体胎牛血清。 5.3 无菌96孔微孔板（带盖）。 5.4 微孔滤膜：0.22μm。 5.5 无菌加样槽。 5.6 麦氏比浊管：0.5麦氏浊度。 5.7 1% 辅酶 I（NAD）：准确称取0.01g NAD，用灭菌去离子水溶解并定容至10mL，0.22μm滤膜过滤。 5.8 胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）培养基：称取8g胰蛋白胨大豆琼脂，加188mL去离子水，摇匀，高压灭菌121℃ 15min，冷至45℃后加入10mL无支原体胎牛血清和2mL 1% NAD，混匀配制200mL TSA培养基。 5.9 胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）培养基：称取6g胰蛋白胨大豆肉汤，加188mL去离子水，摇匀，高压灭菌121℃ 15min，冷至45℃后加入10mL无支原体胎牛血清和2mL 1% NAD，配制200mL TSB培养基，现配现用。 5.10 替米考星标准储备液：按标准品纯度称取，溶于甲醇定容至10mL，-20℃避光保存，推荐浓度范围256μg/mL～2560μg/mL。 6 细菌分离培养和鉴定 副猪嗜血杆菌的分离、鉴定和检测按照 GB/T34750 方法和流程进行。 7 体外敏感性检测 7.1 方法选择说明：可选琼脂稀释法或微量肉汤稀释法，操作任选其一。 7.2 琼脂稀释法 7.2.1 菌悬液制备：细菌在 TSA 培养基中复苏并传代两次后制备菌悬液。 附录A（资料性） 微量肉汤稀释法 96 孔板加样操作示意图。 附录B（资料性） 质控菌株和质控药物使用说明。 附录C（资料性） 结果判定标准和判定流程。 参考文献 （根据原文提供参考文献和相关文献列表）