【地方标准】 八眉猪细管冻精生产技术规程

八眉猪细管冻精生产技术规程 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由青海省农牧厅提出并归口。本标准起草单位：青海省家畜改良中心。 本标准主要起草人：马元梅、张楠、冯宇诚、张晋青、常永梅、赵春川、王芳、郭占泽、赵青山、许发芳、莫常山、王朝风、何得仓、李景、刘于刚。 1 范围 本规程规定了种公猪的选择和调教、采精前准备、采精、精液处理、精液冷冻、细管冻精解冻和镜检、包装、标记和贮存、细管冻精质量评价等内容。本规程适用于八眉猪细管冻精的生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 - GB4143 牛冷冻精液 - GB/T5458 液氮生物容器 - NY/T2823 八眉猪 3 种公猪的选择和调教 3.1 种公猪的选择 种公猪应符合NY/T2823要求，三代系谱清楚。 3.2 种公猪的饲养管理 种公猪单圈饲养定时定量饲喂，以精料为主，满足其营养需要，消化能需求为28.45MJ，体重90kg以下的公猪粗蛋白需求量为14%，90kg以上为12%，每千克饲料含维生素A 3531 IU，维生素E 11 IU。提供充足清洁饮水，经常刷洗保持清洁，每天适度运动1~2小时。 3.3 种公猪的调教 选择发情旺盛的母猪并固定，引诱公猪爬跨，停其爬上母猪后，将公猪阴茎导入空拳内进行采精，反复训练2至3次。 4 采精前准备 4.1 器械 4.1.1 仪器设备 37℃恒温箱、17℃车载恒温箱、水浴锅、移液枪、密度仪、显微镜、离心机、冰箱、低温柜、细管封装一体机、程控冷冻仪、液氮生物容器、干燥箱。 4.1.2 器具 保温集精杯、过滤膜、比色皿、锥形瓶、载玻片、盖玻片、离心管、烧杯、量筒、0.25ml细管、提筒、试管、细管剪。 4.2 器械的清洗 4.2.1 仪器设备的清洗和消毒 各仪器设备应定期用紫外灯照射消毒。使用结束后，应用洁净、柔软的布将残留的精液、水、污物擦拭干净。 4.2.2 器具的清洗和消毒 各器具使用后浸泡在自来水中。洗涤时，先在加有洗涤剂的温热水中刷拭，然后用清水反复冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗。载玻片和盖玻片洗净后用柔软的布擦干备用，其他玻璃器具洗净后放入干燥箱加热至160℃恒温60分钟，自然冷却后待用。0.25ml细管应置于紫外灯下消毒，其他非玻璃材质的器具洗净后自然晾干，用75%酒精棉球擦拭消毒。 4.3 采精场所的卫生和消毒 采精场所保持安静，地面保持清洁卫生，采精前应喷洒0.1%高锰酸钾进行消毒。 4.4 稀释液配制 4.4.1 常温保存稀释液配制 向锥形瓶中加入1000ml双蒸水，分别称取葡萄糖37g、乙二胺四乙酸1.25g、二水柠檬酸钠0.6g、碳酸氢钠1.25g、氯化钾0.075g，溶解于双蒸水中，搅拌均匀，用定性滤纸过滤至另一锥形瓶中，滤液煮沸15分钟，待温度降至常温，称取青霉素钠0.6g、硫酸链霉素1g加入滤液中并混匀。 4.4.2 冷冻基础液配制 向锥形瓶中加入1000ml双蒸水，分别称取葡萄糖11g、柠檬酸14.8g、三羟甲基氨基甲烷24.2g，溶解于双蒸水中，搅拌均匀，用定性滤纸过滤至另一锥形瓶中，滤液煮沸15分钟，待温度降至常温，称取青霉素钠0.6g、硫酸链霉素1g加入滤液中并混匀。 4.4.3 冷冻稀释液I液配制 向锥形瓶中加入800ml冷冻基础液、2ml新鲜卵黄，搅拌均匀，置于17℃备用。 4.4.4 冷冻稀释液II液配制 向锥形瓶中加入940ml冷冻稀释液I液、60ml甘油，搅拌均匀，置于5℃备用。 4.4.5 解冻液配制 向锥形瓶中加入1000ml双蒸水，分别称取葡萄糖50g、二水柠檬酸钠3g、乙二胺四乙酸1g，溶解于双蒸水中，搅拌均匀，用定性滤纸过滤至另一锥形瓶中，滤液煮沸15分钟，待温度降至常温。 5 采精 5.1 台猪和种公猪的准备 选择健壮、大小适中、性情温顺的母猪做台猪。采精前用清水冲洗台猪的外阴、臀部和公猪阴茎、包皮及其周围腹壁，然后用0.01%高锰酸钾溶液对公猪被清洗过的部位消毒，再用温水冲洗干净。 5.2 采精频率 后备种公猪每周采精一次，成年种公猪每周可采精两次。