【地方标准】 口蹄疫病毒RT-LAMP检测方法

本标准规定了口蹄疫病毒RT-LAMP检测方法，适用于动物及其产品中的口蹄疫病毒快速筛查。该方法包括病毒总RNA提取、引物设计、试剂使用及操作步骤等内容。 1. 范围 本标准规定了口蹄疫病毒RT-LAMP检测的操作方法，适用于动物及其产品中的口蹄疫病毒的快速筛查。 2. 规范性引用文件 本文件引用了以下标准，且仅限于注明日期的版本适用： - GB/T 22915 口蹄疫病毒荧光RT-PCR检测方法 - GB/T 6682 实验室用水规格和试验方法 3. RT-LAMP检测方法 3.1 材料与试剂 3.1.1 仪器与器材：时浊度分析仪、水浴锅、计时器、高速台式冷冻离心机（12000 rpm/min）、台式离心机（3000 rpm/min）、混匀器、冰箱、微量可调移液器、Eppendorf管（1.5 mL）。 3.1.2 试剂： - 所用试剂均为分析纯，分装试剂使用无RNA酶污染容器，DEPC水处理后高压灭菌。 - 病毒总RNA提取试剂Trizol、氯仿、异丙醇、PBS、75%乙醇等。 - RT-LAMP检测试剂盒，目视检测试剂盒，阴性、阳性对照。 3.2 抽样 3.2.1 采样工具：应配备棉拭子、剪刀、镊子、注射器、Eppendorf管、研钵等，所有工具需高压灭菌。 3.2.2 样品采集： - 水泡皮、水泡液、血液、口腔分泌物和组织样品需冷藏或放入含抗生素PBS的灭菌管内。 - 采集时编号并作好记录，确保样品新鲜，及时送检。 3.2.3 样品运输：样品放入密闭的塑料袋内，加冰密封，在保温箱中运输。 3.2.4 样品制备： - 水泡液、血液、口腔分泌物样品在混匀器上混合后使用。 本标准由辽宁省畜牧兽医局提出并归口，辽宁省动物疫病预防控制中心和辽宁省动物医学研究院负责起草，主要起草人包括李井春、曹东、杨本勇、关淼等。