【地方标准】 植物检疫实验室常规检验技术 病毒

四川省地方标准 DB51/T2478-2018《植物检疫实验室常规检验技术 - 病毒》规定了植物检疫实验室病毒检验的原理、试剂与材料、仪器与用具、取样及送样、检测方法、结果判定和样品保存等内容。 1 范围 本标准规定了植物检疫实验室病毒检验的原理、试剂与材料、仪器与用具、取样及送样、检测方法、结果判定和样品保存。适用于植物检疫实验室病毒的检验和鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB15569 农业植物调运检疫规程 3 原理 病毒病一般根据病害症状很难确定病毒种类，采用免疫学和分子生物学方法，可快速根据有关判断标准进行检验鉴定。 4 试剂与材料 4.1 DASELISA 血清学检验试剂 除非另有说明，本标准中仅使用确认的分析纯试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。 - 包被抗体：病寿抗体移释度按市售产品要求进行。贮藏于4℃备用。 - 酶标抗体：用碱性磷酸酶标记的病毒免疫球蛋白抗体，按市售产品要求进行稀释，贮藏于4℃冰箱保存备用。 - 包被缓冲液：取2.93g碳酸氢钠（NaHCO3）、1.59g碳酸钠（Na2CO3），用1000ml蒸馏水溶解，pH值为9.6，贮藏于4℃冰箱保存备用。 - PBST洗涤液：取1.15g无水磷酸氢二钠（Na2HPO4）、0.2g氯化钾（KCl）、0.2g无水磷酸二氢钾（KH2PO4）、8.0g氯化钠（NaCl）、5ml Tween-20，用1000ml蒸馏水溶解，pH值为7.2。 - 样品提取缓冲液：取20g聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、2.0g蛋清蛋白、1.3g无水亚硫酸钠（Na2SO3）、0.2g叠氮化钠（NaN3）、0.5ml吐温-20、8g氯化钠、0.2g磷酸二氢钠、1.15g磷酸氢二钠、0.2g氯化钾，用1000ml蒸馏水溶解，贮藏于4℃冰箱保存备用。 - 共轭物缓冲液：取0.2g牛血清白蛋白，用1000ml PBST缓冲液溶解，贮藏于4℃冰箱保存备用。 - 底物：对硝基苯磷酸二钠。 - 底物缓冲液：取0.1g氯化镁（MgCl2）、90.39g二己醇胺（CH2CH2OH）、19.82g二己醇胺HCl（CH2CH2OH-HCl），用1000ml蒸馏水溶解，pH值为9.8，贮藏于4℃冰箱保存备用。