【地方标准】 鸡白痢防制技术规程

DB15/T99—2020
鸡白痢防制技术规程
内蒙古自治区地方标准
(代替DB15/T99-1993)
发布日期：2020-07-30
实施日期：2020-08-30

前言
本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。
本标准代替了DB15/T99—1993《鸡白病防制技术规程》，与DB15/T99—1993相比，除编辑性修改外主要技术变化如下：
1. 名称修改为《鸡白痢防制技术规程》；
2. 删除了扑灭标准及消灭标准（见1993版的4.1），增加了净化标准的相关内容（见4.2.2）；
3. 修改了诊断技术（见2，1993版的2）。
本标准由内蒙古自治区农牧厅归口。本标准起草单位：内蒙古自治区动物疫病预防控制中心。本标准主要起草人：萨茹拉、马立峰、郭宇、申捷、张伶俐、贾皓、云涛、苏胜杰、戴晓光、王永杰、特木尔巴根、武娅楠、赵心力。
本标准的历次版本发布情况为：DB15/T99—1993。

1 范围
本标准规定了鸡白痢的诊断技术、防制措施和净化措施。本标准适用于饲养、经营、运输、屠宰、加工鸡（火鸡）的单位和个人。

2 诊断技术
2.1 流行特点
鸡白痢是由鸡白痢沙门菌引起的一种不同品种、不同日龄的鸡均易感的传染病。本病的传染源主要是病鸡和带菌鸡，有水平传播和垂直传播多种途径，三周龄内雏鸡发病率和病死率高。
2.2 临床诊断
2.2.1 雏鸡
潜伏期一般为4~7d。病雏表现为怕冷、精神沉郁、昏睡、羽毛逆立，排出白色粘稠或淡黄色、淡绿色稀便，羽毛与肛门周围不洁。少数出现呼吸困难、关节肿胀、失明等症状，最后衰竭死亡。
2.2.2 育成鸡及成年鸡
多呈慢性或隐性感染，症状不明显，表现为因卵黄囊炎引起的腹膜炎，腹膜增生而呈“垂腹”现象，母鸡产蛋量与受精率下降。
2.3 病理变化
2.3.1 雏鸡
多呈急性死亡，病理变化不明显。病程稍长者呈现心肌、肺、肝、盲肠、大肠及肌胃肌肉中有坏死灶或结节，胆囊肿大，输尿管扩张等病理变化。盲肠中有干酪样物，常有腹膜炎。稍大的病雏有出血性肺炎，肺部有灰黄色结节。
2.3.2 育成鸡
肝肿大，呈现暗红色或深紫色，表面可见散在或弥散性的小红色或白色大小不一的坏死灶，质地极脆，常见有出血变化。
2.3.3 成年鸡
成年母鸡常见为卵子变形、变色、呈现囊状，有腹膜炎及腹腔脏器粘连，常有心包炎。成年公鸡睾丸极度萎缩，输精管腔增大，充满稠密的均质渗出物。
2.4 实验室诊断
2.4.1 细菌分离鉴定
2.4.1.1 采集病料
无菌采集被检鸡的肝、脾、肺、卵巢等脏器，取脏器组织5g~10g，研磨后进行病原分离培养。
2.4.2 分离培养
2.4.2.1 试剂
增菌培养基：亚硒酸盐煌绿增菌培养基、四硫磺酸钠煌绿增菌培养基。
鉴别培养基：SS琼脂、麦康凯琼脂。
2.4.2.2 操作
将研磨的病料分别接种在亚硒酸盐煌绿增菌培养基、四硫磺酸钠煌绿增菌培养基、SS琼脂或麦康凯琼脂培养基平皿上，37℃培养24h~48h。在SS琼脂或麦康凯琼脂培养基平皿上若出现白色或半透明、圆形的光滑菌落，判定为可疑菌落。若在鉴别培养基上无可疑菌落出现时，应从增菌培养基中取菌液在鉴别培养基上划线分离，37℃培养24h~48h，若有可疑菌落出现，则进一步做鉴定。
2.4.2.3 病原鉴定
2.4.2.3.1 生化试验和运动性检查
2.4.2.3.1.1 试剂
三糖铁琼脂和半固体琼脂。
2.4.2.3.1.2 操作
将可疑菌落穿刺接种在三糖铁琼脂斜面，并在斜面上划线，同时接种在半固体培养基，37℃培养24h后观察。
2.4.2.3.1.3 结果判定
若无运动性，并在三糖铁琼脂上出现阳性反应时，则进一步做血清学鉴定；若有运动性，说明不是鸡白痢沙门菌感染。三糖铁琼脂典型阳性反应为斜面产酸变红，底层产酸变黄；部分菌株斜面和底层均产酸变黄。
2.4.3 全血或血清平板凝集试验
2.4.3.1 试剂
鸡白痢多价染色平板抗原、强阳性血清（500IU/mL）、弱阳性血清（1IU/mL）、阴性血清。
2.4.3.2 器材
玻璃板、移液器、枪头等。
2.4.3.3 操作步骤
在20℃~25℃环境条件下，用移液器吸取抗原30μL，垂直滴于玻璃板上，然后取被检鸡的全血或分离后所得血清30μL，与抗原混合均匀，并使其散开至直径约为2cm，计时判定结果。同时，设置强阳性对照、弱阳性对照和阴性血清对照。
2.4.3.4 结果判定
2.4.3.4.1 凝集试验判定标准
100%凝集（++++）：紫色凝集块大而明显，反应液清亮；
75%凝集（+++）：紫色凝集块较明显，反应液有轻度浑浊；
50%凝集（++）：出现明显的紫色凝集颗粒，反应液较为浑浊；
25%凝集（+）：仅出现少量的细小颗粒，反应液浑浊；
20%凝集（-）：无凝集颗粒出现，反应液浑浊。
2.4.4 PCR检测
2.4.4.1 试剂
10×PCR Buffer、dNTP、Taq酶、DNA Marker、乙醇、DEPC水、TAE、琼脂糖、阳性对照（已鉴定的鸡白痢沙门菌）和阴性对照。
2.4.4.2 器材
1.5mL灭菌离心管、恒温水浴锅、离心机、混匀器、电泳仪、PCR仪、凝胶成像仪等。
2.4.4.3 DNA模板的制备
取灭菌的1.5mL离心管，做好标识。每管加入600μL裂解液，分别加入被检样本（增菌培养物、研磨好的组织上清）、阴性对照、阳性对照各200μL，再加入200μL氯仿，混匀器上振荡混匀5s，于4℃ 12000r/min离心15min；取灭菌的1.5mL离心管，加入-20℃预冷400μL异丙醇，吸取裂解好的被检样本、阴性对照、阳性对照上清液转移至相应的管中，避免吸出中间层，颠倒混匀；于4℃ 12000r/min离心15min，弃上清，倒置于吸水纸上沾干液体；加入600μL 75%预冷乙醇，颠倒洗涤；于4℃ 12000r/min离心15min，弃上清，倒置于吸水纸上沾干液体；10000r/min离心10s，用微量加样器将其吸干，室温干燥5~10min；加15μL DEPC水，溶解管底的DNA，5000r/min离心5s，-20℃保存备用。
2.4.4.4 PCR反应体系
PCR反应体系（总体积约25μL）：
- 无菌超纯水：5μL
- 10×PCR Buffer（含Mg2+）：4μL
- dNTP（2.5mmol/L）：1μL
- speC上游引物（10μmol/L）：1μL
- speC下游引物（10μmol/L）：0.25μL
- Taq酶（5U/μL）：2μL
- DNA模板：剩余体积