【地方标准】 绵羊日粮可代谢生脂物质（MLS）指标的测定技术规程

DB15/T1901—2020
绵羊日粮可代谢生脂物质（MLS）指标的测定技术规程
The technical specification for the determination of dietary metabolizable lipogenous substances (MLS) in sheep
内蒙古自治区地方标准
发布日期：2020-06-10
实施日期：2020-07-10
发布单位：内蒙古自治区市场监督管理局

前言
本标准按GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由内蒙古自治区农牧业科学院提出。本标准由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC19）归口。本标准起草单位为内蒙古自治区农牧业科学院。本标准主要起草人：杜瑞平、卢德勋、高民、凌树礼、马燕芬、胡红莲、王丽芳、羿静。

1 范围
本标准规定了绵羊日粮可代谢生脂物质（MLS）指标的定义和测定方法。本标准适用于绵羊日粮可代谢生脂物质（MLS）指标的测定。

2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T30431 实验室气相色谱仪
HJ957 水质钻的测定 火焰原子吸收分光光度法

3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1 挥发性脂肪酸 volatile fatty acids (VFA)
日粮中的碳水化合物经瘤胃微生物发酵后产生的重要产物，以乙酸、丙酸、丁酸为主，是反刍动物的主要能量来源及合成乳脂肪和体脂肪的前体物。
3.2 可代谢生脂物质 metabolizable lipogenous substances (MLS)
饲料或日粮经动物消化吸收后，可以物质本身提供的、可利用的生脂物质（折合成乙酸总量），单位为 g/d。
3.3 瘤胃VFA基本产生速率 ruminal VFA production rate
瘤胃中每小时发酵生成的VFA毫摩尔数 (mmol/h)。
3.4 瘤胃VFA流通速率 ruminal VFA flow rate
瘤胃中每小时向后消化道流通的VFA毫摩尔数 (mmol/h)。
3.5 瘤胃VFA吸收速率 ruminal VFA absorption rate
每小时经瘤胃壁吸收的VFA毫摩尔数 (mmol/h)。
3.6 瘤胃VFA吸收率 ruminal VFA fractional absorption rate
每小时经瘤胃壁吸收的VFA数量占每小时产生量的百分比 (%)。

4 仪器和试剂
4.1 仪器
电子分析天平 (0.0001g)，pH酸度计，气相色谱仪，原子吸收仪，高速离心机 (10000 rpm/min)。
4.2 试剂
乙酸、丙酸、丁酸、乙酸钴、乙二胺四乙酸、氢氧化钠、过氧化氢、乙醇等均为化学分析纯。

5 试验动物、日粮与饲养管理
5.1 试验动物
要求体况良好、年龄、体重相近的6只以上安装有永久性瘤胃瘘管的任一成年绵羊品种。
5.2 日粮配制
试验日粮可对应相应生理阶段参照中国或NRC绵羊饲养标准配制。
5.3 饲养管理
试验羊每隔3h给予等量混合日粮，每日饲喂8次。每期试验在预饲期和灌注期内均单笼饲养，预饲期10～14天，预饲期内试验羊自由饮水，灌注期停止供水，用灌注液满足水的需要。

6 测定步骤
6.1 标记物的制备、投放与乙酸、丁酸的灌注
6.1.1 标记物的制备
Co-EDTA的制备根据Uden等（1980）介绍的方法进行。称取25g乙酸钴、29.2g乙二胺四乙酸和4.0g氢氧化钠放入一个2L烧杯中，加入200mL蒸馏水，加热至80℃进行溶解，冷却后再加入20mL 30%过氧化氢溶液，室温放置4h后加入300mL 95% (V/V) 乙醇溶液，置于冰箱12h，然后经定性滤纸过滤并用85% (V/V) 乙醇溶液冲洗数遍。最后收集滤纸上粉红色物质于瓷盘中，置于100℃烘箱中烘干即可。实测该Co-EDTA标记物Co含量为14.08%。
6.1.2 灌注前标记物的投放
连续饲喂10～14天后，灌注期第一天晨饲前采集20mL瘤胃液，将1g Co-EDTA溶于50mL蒸馏水中，经采样管通过瘤胃瘘管灌入绵羊瘤胃内不同位点。灌注完毕再抽取瘤胃液反复冲洗采样管3次，并将冲洗瘤胃液回灌瘤胃内。此后2h、4h、6h、9h、12h、18h和24h分别抽取瘤胃液20mL，用以测定Co、pH和VFA。
6.1.3 乙酸、丁酸的启动灌注和连续灌注
6.1.3.1 启动灌注
上述Co-EDTA投放后继续连续饲喂一周，第八天晨饲前开始启动灌注，将100mL启动灌注液通过注射器经采样管迅速注入瘤胃内不同位点，灌注完毕用采样管充分搅匀瘤胃液，并抽取瘤胃液反复冲洗采样管和注射器，冲洗瘤胃液及时回灌瘤胃内。
6.1.3.2 连续灌注
启动灌注结束后进行连续灌注。连续灌注3h后开始从瘤胃取样，瘤胃液每2h采一次，共采集5次。连续灌注结束后，紧接着灌注水溶液，灌注速率不变，灌水中间每小时采瘤胃液一次，共采集3次。采样结束后让羊自由采食、饮水。
6.1.4 乙酸、丁酸的启动灌注液和连续灌注液配制
启动灌注液和连续灌注液见附录A的表A.1、表A.2。
6.2 样品处理及分析方法
6.2.1 瘤胃液样品处理
采集的瘤胃液立即用四层纱布过滤，取4mL瘤胃液，加1mL 25%的偏磷酸固定，静置30min，3000rpm下离心10min，直接上机测定VFA和Co或-20℃冰箱保存待测。
6.2.2 VFA测定
用气相色谱仪 (GB/T20431) 依内标法进行测定，内标物为巴豆酸。
6.2.3 Co的测定
原子吸收法测定应符合HJ957的要求。
6.2.4 瘤胃液pH值
pH酸度计直接测定。

7 计算公式
7.1 可代谢生脂物质（MLS）计算公式
可代谢生脂物质（MLS）按式（1）计算：