【地方标准】 饲料中T-2毒素的测定高效液相色谱法

ICS 备案号：28168-2010 DB51 四川省地方标准 DB51/T 1078—2010 饲料中T-2毒素的测定 高效液相色谱法 Determination of T-2 toxin in feeds High performance liquid chromatography 2010-06-01发布 2010-07-01实施 四川省质量技术监督局 发布 前言 本标准的附录A为资料性附录。本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。本标准由四川省质量技术监督局批准。本标准由四川省饲料工作总站负责起草。本标准起草人：柏凡、李云、魏敏、王宇萍、张静、赵立军。 1 范围 本标准规定了饲料中T-2毒素含量的高效液相色谱法（HPLC）。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料及饲料原料的测定。本标准检出限为0.1 mg/kg。 2 规范性引用文件 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料采样 GB/T 20195 动物饲料试样的制备 3 原理 试样经甲醇-水提取，提取液经免疫亲和柱净化、浓缩及衍生后，用高效液相色谱仪-荧光检测器检测，采用外标法计算T-2毒素含量。 4 试剂和溶液 除特殊说明外，所有试剂均为分析纯，色谱用水符合GB/T 6682一级用水规定。 4.1 乙腈：色谱纯 4.2 甲醇：色谱纯 4.3 甲苯：色谱级 4.4 甲醇-水（8+2）提取液：取80 mL甲醇加20 mL水混匀 4.5 4-二甲基氨基吡啶（DMAP）溶液：称取0.0325 g定容至100 mL 4.6 1-氰酸葱（1-AN）溶液：称取0.030 g定容至100 mL 4.7 T-2毒素标准品：纯度≥98% 4.7.1 标准贮备液：10 mg标准品用乙腈溶解定容至100 mL，浓度100 μg/mL，-20℃保存，有效期6个月 4.7.2 标准工作溶液：配制0.05、0.10、0.50、1.00、2.00、5.00 μg/mL系列标准溶液，2~8℃保存，有效期1个月 注意：接触T-2毒素容器需用4%次氯酸钠浸泡后清洗；操作需佩戴手套并在通风橱内进行 4.8 T-2毒素免疫亲和柱 5 仪器与设备 5.1 分析天平（0.1 mg） 5.2 超声波清洗器 5.3 离心机（≥5000 r/min） 5.4 超纯水处理器 5.5 涡旋混合器 5.6 高效液相色谱仪（配荧光检测器） 5.7 氮吹仪 5.8 0.45 μm滤膜 6 试样制备 按GB/T 14699.1采样，按GB/T 20195制备实验室样品约1 kg，四分法缩分至约200 g，粉碎过1 mm筛后混匀备用。 7 分析步骤 7.1 试样溶液制备 7.1.1 提取：称取25 g试样加入100 mL甲醇-水（8+2），超声提取20 min，离心后取上清液过滤，稀释待净化。 7.1.2 净化：样品通过免疫亲和柱，水洗后甲醇洗脱，氮吹干燥。 7.1.3 衍生：加入DMAP和1-AN溶液反应，水浴衍生后氮吹干燥，加入流动相复溶，过滤上机测定。 7.2 色谱条件 7.2.1 色谱柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）或等效柱 7.2.2 柱温：30℃