【烟草标准】 烟草种子　转基因的测定

ICS 65.160
X 85
备案号:10587—2002

中华人民共和国烟草行业标准

YC/T 150—2002

烟草种子 转基因的测定
Tobacco seed—Determination of genetically modified organism

国家烟草专卖局 发布

前 言

本标准由全国烟草标准化委员会农业分技术委员会提出。

本标准由全国烟草标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：中国烟草东北农业试验站。

本标准主要起草人：焦庆明、郭兆奎、闫新甫、万秀清、于艳华、魏继承。

烟草种子 转基因的测定

1 范围

本标准规定了烟草种子转基因的测定方法。

本标准适用于烟草种子。

2 引用标准

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

YC/T 149—2002 烟草及烟草制品 转基因的测定

3 术语

应符合 YC/T 149—2002 第 2 章的规定。

4 实验室要求

应符合 YC/T 149—2002 第 3 章的要求。

5 试剂

应符合 YC/T 149—2002 第 4 章的要求。

6 仪器与耗材

应符合 YC/T 149—2002 第 5 章的要求。

7 样品的取样方法

以品种为单位，即每个品种作为一个样品。对虽为同一品种，但种子产地或种子生产年份不同，也作为单一样品取样。每一样品随机多点取样 10 g，样品编号注明品种名称、种子产地和生产年份。

8 DNA 提取

8.1 前处理

随机取烟草种子 0.5 g 放入装有滤纸保湿的培养皿中，28℃光照下培养 5 d。种子萌发出苗后，用滤纸吸出表面水分。

8.2 DNA 提取

8.2.1 种子萌发后提取

8.2.1.1 种子萌发幼苗称量约 300 mg，在灭菌的研钵内加液氮研磨呈粉末，装入 1.5 mL 离心管中。

8.2.1.2 取 300 mg 液氮研磨后的粉末，加入 200 μL 2×CTAB 提取缓冲液，充分混匀后，65℃水浴 10 min。

8.2.1.3 加入等体积的三氯甲烷：异戊醇（24 : 1），混合均匀 12 000 r/min 离心 4 min。