【地方标准】 动物疫病免疫抗体监测技术规范

ICS11.220 B41 备案号：42001-2014 DB21 辽宁省地 方 标准 DB21/T2250-2014 动物疫病免疫抗体监测技术规范地方标准全车 Techniques specilitcation for immune antibody surveillance of animal diseaseDB21 2014-03-07发布 宁省质量技术监督局 2014-05-07实施 发布 前 言 本标准按照GB/T1.12009给出的现则并起草。本标准附录A-F为资料性附录。 本标准由辽宁省动物疫病预防控制中心提出。本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。本标准由辽宁省质量技术监督局发布DB21/T22502014 本标准负责起草单位：辽宁省动物疫病预防控制中心、辽宁省动物医学研究院本标准起草人：魏湾谷志大张雅为段亚良杨作丰李红魁兰德松王竹杨国丽郑洪玲孙世宇DB21 1范围 动物疫病免疫抗体监测技术规范DB21/T22502014 本标准规定了动物疫病免疫抗体监测过程中样品采集（采样器材、采样方法、采血量、全血保存、血清分离与保存）、样品接收及前处理、监测、监测结果应用、血清留样等技术。本标准适用于口蹄疫、高致病性禽流感、高致病性监耳病、猪瘟、新城疫5种动物疫病免疫抗体的监测活动。 2规范性引用文件 方称雅全文公邢 下列文件对十木文件的应口是心不可少的。凡是注日期的网文件，仅所注日期的版木适用于木文（详）适用子个文件 件。凡是不注H期的引用支件，其最新版本GB/T16550-2008新减授诊断 方 GB/T165—200%指痘技术 GB/T18090-2008猪警殖与时呼吸综合征诊断方法DB21 GB/T 18935 00V口蹄 2003高致病值 8936 GB/T 3样品采集 3.1采样器材 采样所需器材：防护服、工粉乳胶手套、防护口罩、注射器、针头、记号笔、签字笔、空白标签纸、胶布、75%酒精棉球、碘酒梳球、15mL的离心等。 3.2采样方法 P管、冰袋、冷藏容器、消毒药品、记录表格对采血部位的皮肤先剃（拔）毛，碘酊消毒，75%的酒精消毒，待干燥后采血。采血方法推行猪站立式或仰卧式前臂或前腔静脉，牛站立式尾静脉或颈静脉、羊站立式颈静脉、禽类翅静脉采血，采血过程严格无菌操作. 3.3采血量 单一病种抗体监测的每头（只）采集2~3mL全血，多病种抗体检测的每头（只）采集5～10mL全血3.4全血保存 采集好的全血转入盛血试管，斜面存放，室温凝固后直按放在盛有冰块的保温箱，送实验室。从全血采出到血清分出的时间不超过10h。3.5血清分离与保存 1 3.5.1分离血清 DB21/T22502014 凝固全血在室温24h后，有血清析出时，用无菌针剥离血凝块，然后放入1℃冰箱4-8h后，待大量血清析出时，吸出血清。必要时经离心机3000rpm、30min离心，吸出血清。3.5.2血清保存及运送 分离的血清，般不加防腐剂。血清若在1～2周内即可检验，可放在4C冰箱内保存：如果保存时间较长，应放在-20℃~-80℃冰箱内保存。运送血清时可将血清放在盛有冰块的保温箱中运送3.5.3血清编号及采样单填写 采直同时，填写采样单，包括场名、畜种、日龄、联系人、电话、饲养数量、采样数量、样品名称，编号、免疫情况、临床表现等。样品标签和时条应用签字笔填写，保温容器外封条用钢笔或签字笔填写，样品管上用记号笔做标记。采样单使用钢笔或签字笔填写，一式三份，一份由被采样单位保存，一份由采样单位保存，一份由检测单位保存：采样单应装在攀料包装袋中，并随样品送检测单位。采样单参见附录A. 4样品接收及前处理 地方标准全 样品送达实验室后：检位业务接待部门进行接收样品登卡博接收样品学记表，进行样品 前处理，并最好样品登记表和样品前处理登记表参见附录、5监测 5.1监测数量 DB21 免疫效果监测时，每群至少随机采集血清样品30份：5.2监测时问和频率 根据监测月的确定。母源抗体监测从1龄升始，每周检测1次，14龄后2周检测1次，直至母源抗体消失。免疫效果监测在免疫后2～3周开始，每季度至少检测1次：种用动物至少每半年检测1次。5.3检测方法 5.3.1高致病性禽流感 按GB/T18936-一2003血凝-血凝抑制（HA-HI）试验方法进进行。5.3.2口蹄疫 按GB/T18935—2003液相阻断ELTSA试验方法进行5.3.3猪瘟 按GB/T16551—2008阻断ELISA试验方法或间接ELISA试验方法进行。5.3.4高致病性猪蓝耳病 按GB/T18090—2008间按酶联免疫吸附（间按ELISA）试验方法进行。2 5.3.5新城疫 按GB/T16550—2008血凝-血凝抑制（HA-HI）试验方法进行。5.4检测试剂的选择 DB21/T22502014 检测试剂应使用农业部认可或指定试剂厂家生产的试剂，使用前应进行重复性和稳定性验证。6监测结果应用 6.1检测结果记录与汇总 6.1.1抗体检测结果记录 每份血洁检测完毕，按编号对应进行记录，抗体检测结果记录表参见附录D。6.1.2抗体检测结果汇总 霖雅全文公开 以监测区县、乡镇、规模客禽场、行政村为单位，分单位、时间、动物病种、动物种炎、动物年（日、月）龄等分项进行汇总抗体检洞省地 方 6.2免疫效果判定 高致病性高流感了 6.2.1 B21 体效价≥定为疫合格。存栏 家禽免疫灭活双由21天后 进行 效果监测 禽群免疫抗休合格率≥70%判 6.2.2口蹄度 为合 猪免疫28天后，其他高免疫21天后，进行免疫效果监测。液和阻断FL1SA的抗体效价≥2判定为免疫合格。存栏家畜免疫抗体合格车≥70%判定为合格。6.2.3高致病性猪蓝耳病 活疫苗免疫28天后，进行免疫效果监测。高致病性猪蓝耳病用ELISA抗体检测阳性判为台格。有栏猪免疫抗体合格率≥70%判定为合格。6.2.4猪 猪瘟活疫击和传代细胞源猪瘟活疫苗免疫2I天后，进行免疫效果监测。猪瘟抗体阻断ELIS入检测试验抗体阳性判定为免疫合格，猪瘟抗间接ELISA检测试验抗体阳性判定为合格。存栏猪免疫抗体合格率≥70%判定为合格。 6.2.5新城疫 免疫21天后，进行免疫效果监测。新城疫抗体血凝抑制试验（HD）抗体效价≥2判定为免疫合格。存栏禽群免疫抗体合格率≥70%判定为合格。6.3监测结果的应用 6.3.1制定和调整免疫程序 3