【行业标准】 危险品生殖毒性试验方法

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T2168—2008
危险品生殖毒性试验方法
Test method of reproduction toxicity for dangerous goods2008-09-04发布
中华人民共和国
国家质量监督检验检疫总局
2009-03-16实施
-HKAONKAca-
SN/T2168—2008
本标准修改采用联合国经济合作与发展组织（OECD）化学品测试方法No.415《一代繁殖毒性试验》(1983）、No.416《两代繁殖毒性试验》（2001）。本标准与OECD化学品测试方法No.415、No.416相比，存在以下差异：对OECD化学品测试方法No.415、No.416进行了编辑性修改：增加了前言部分
本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出。本标准由国家认证认可监督管理委员会归口。本标准负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局本标准参加起草单位：中化化工标准化研究所、江南大学、天津市检验检疫科学技术研究院。本标准主要起草人：季宁涛、张园、周磊、于智睿、熊中强、赵黎华。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准I
1范围
危险品生殖毒性试验方法
本标准规定了危险化学品生殖毒性试验的试验方法和试验结果：本标准适用于对危险化学品进行生殖毒性的测定2规范性引用文件
SN/T2168—2008
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB14924.1实验动物配合饲料通用质量标准GB14925实验动物环境及设施
3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。3.1
生殖reproduction
人和哺乳动物繁衍种族的复杂的生理过程，包括两性生殖细胞或称配子的发生、配子的释放、性周期和性行为、卵细胞受精、受精卵的卵裂、胚泡形成、着床、胚胎形成、胚胎发育、器官形成、胎儿发育、分娩和哺乳、出生后发育直至性成熟并繁殖下一代的过程。3.2
生殖毒性reproductiontoxicity化学毒物对生殖系统产生的不良效应，包括对父母双方和对胚胎、新生儿的损害。4试验方法
4.1试验器材和试剂
4.1.1器材
灌胃针、注射器及针头、外科手术剪、手术刀、无齿镊、电子天平、动物体重秤4.1.2试剂
蒸馏水、生理盐水或二甲基亚砜等溶剂4.2试验动物
选用大鼠，每一剂量组至少20只雌鼠、10只雄鼠。试验动物饲养条件应符合GB14924.1和GB14925有关规定。
4.3剂量和分组
将试验动物随机至少分为两个剂量组和一个对照物。最高剂量应使亲代动物出现明显的毒性反应，但不引起动物死亡；低剂量应不引起亲代及其子代动物的任何毒性反应。如果受试样品的毒性较低，1000mg/kg体重的剂量仍未对繁殖过程有任何毒副作用，则可以采用限量试验，即试验不需要设其他剂量组。若高剂量的预试验观察到明显的母体毒性作用，但对生育无影响，也可以采用限量试验1
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4.4染毒方法
4.4.1一代繁殖试验
雄性动物：在交配前60d开始染毒，覆盖从精原细胞到精子的整个发育过程；雌性动物：至少要在交配前16d染毒，染毒期要覆盖卵子发育期、怀孕期和哺乳期4.4.2二代繁殖试验
按照表1的程序进行染毒
表1二代繁殖毒性试验染毒程序
时间/d
Fo出生
Fe离乳
Fo开始染毒（连续染毒100d）
Fo交配
Fi出生
Fi离乳F。染毒结束
注：F。为亲代，F为子1代.F2为子2代4.4.3交配方法及妊娠检查
KANiKAca-
Fi开始染毒（连续染毒120d）
Fi交配
F2出生
F2离乳
FI染毒结束，病理解
雄性和雌性动物按1：1或1：2的比例进行交配。雌鼠应始终与同剂量组的同一只，但不是同窝所生的雄鼠合笼直至受孕，合笼最长时间可为3周。在交配过程中，每天早晨应对雌鼠进行检查，查看有无阴栓或阴道中是否有精子。将检查到精子或阴栓的当天计为雌鼠妊娠的第0天。4.4.4每窝新生幼鼠数量的调整
F1代出生后的第4天，应将仔鼠数尽量随机调整到每窝4雌和4雄。若得不到4雌和4雄时可作不均等的调整（如5雄3雌）。每窝的幼仔数小于8只时，可不进行调整。F2子代按同样的方法进行调整。
5试验结果
5.1观察记录
检查记录活仔数和死仔数、性别比和产生畸形活仔的雌性动物数。5.1.1体重
参与繁殖的动物（亲代和F子代）应在染毒的第1天进行称量，以后每周称量体重一次。数据应逐只进行记录。产仔后，每窝仔鼠需要称量体重时，母鼠的食物摄人量也应同时计算。以每窝为单位，对仔鼠于出生的当天上午、第4天、第7天、第14天和第21天进行称量。5.1.2大体观察
每日至少对动物进行一次仔细的观察。记录有无行为改变、难产或滞产以及所有的毒性反应（包括死亡）。在交配前和交配期，应计算每周的食物摄入量，在妊娠中可考虑逐日记录。交配结束时，采集亲代雄鼠附辜的精子，显微镜下计数200个精子，观察其活动性、形状及数量。5.1.3妊娠观察
妊娠周期应该从怀孕的第0天开始计算。生产下的仔鼠应尽早分辨性别，记录每窝的出生数、活仔2下载标准就来标准下载网
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数以及幼仔外观有无异常和畸形。同时记录母鼠或仔鼠在生理上和行为上的异常表现。5.1.4大体解剖
死亡和到期处死的亲代和成年的F1子代动物都应解剖进行大体检查，肉眼观察有无组织器官形态上的改变，特别是生殖器官。死亡或濒临死亡的仔鼠也应接受检查，查看是否有外观或器官形态的缺陷。
5.1.5病理组织学检查
保留上述剖检的所有亲代和F1子代动物的卵巢、子宫、子宫颈、阴道、睾丸、附睾、精囊、前列腺、脑下垂体和靶器官标本。先对最高剂量组和对照组的动物标本以及剖检中发现异常的标本进行组织病理学检查。如最高剂量组没有发现有意义的病变，其他剂量组的标本可不必再进行病理检查。反之，若最高剂量组发现有意义的病理改变，则其他剂量组相关的标本也应作进一步的检查。5.2结果计算
5.2.1生育力指数
按式(1)计算：
受孕率：
5.2.2受孕指数
按式(2)计算：
5.2.3存活力指数
按式（3)计算：
5.2.4其他指标
妊娠雌鼠数
×100%
交配雌鼠数
正常妊娠率=正常分娩的雕鼠数×100%妊娠雌鼠数
出生后4d存活幼仔数×100%
出生存活率=
出生当时存活幼仔数
交配指数（交配占发情周期的百分率）：一雌性生育力指数（妊娠雌鼠数占接触育龄雄鼠的雌鼠总数的百分率）；雌性生殖率指数（使雌鼠受孕的雄鼠数占与育龄未孕雌鼠接触的雄鼠总数的百分率）；生后24h、12d的存活指数。
5.3数据处理
（1）
数据可以用表格进行统计，表中应显示每组的试验动物数、交配的雄性动物数、受孕的雌性动物数、各种毒性反应及其出现动物的百分数5.4结果评价
逐一比较剂量组动物与对照组动物繁殖指数是否有显著性差异，以评定受试样品有无生殖毒性，同时还可根据统计学差异出现在哪个指标上（如体重、观察指标、大体解部和病理组织学检查结果等），进一步评价生殖毒性的损害作用特点。SN/T 2168-2008
中华人民共和国出人境检验检疫行业标准
危险品生殖毒性试验方法
SN/T2168—2008
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中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷-HKAoNKAca-
8002—8912 /S
开本880×12301/16
印张0.5
字数7千字
2008年11月第一版
2008年11月第一次印刷
印数1—2000
书号：155066·2-19248
定价6.00元
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