【SN商检标准】 马铃薯V病毒检疫鉴定方法

SN/T 1135.10-2013.Detection and identification of potato virus V.
1范围
SN/T 1135.10规定了马铃薯V病毒检疫鉴定的基本原则和方法。
SN/T 1135.10适用于所有进出境种薯、商品用薯、组培苗和脱毒苗等马铃薯种质和番茄等茄科作物中可能带有马铃薯V病毒的检疫鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
SN/T 1840植物病毒 免疫电镜检测方法
3.原理
3.1 马铃薯V病毒学名与分类地位
学名:Potato virus V
缩写:PVV
分类地位:马铃薯Y病毒科(Poyviridae)马铃薯Y病毒属(Potyurus)。
3.2检疫鉴定依据
马铃薯V病毒的血清学特性分子生物学特性和病菲粒体形态是检交鉴定的主要依据。
该病毒的相关资料参见附录人
4仪器设备、用具及试剂
4.1 主要仪器设备
酶联检测仪、洗板机、高速冷冻台式离心机、PCR仪、荧光定量PCR仪、电泳仪,水平电泳槽，凝胶成像仪、水浴槽、透射电子显微镜、天平(感量:0.001g)等。
4.2主要试剂
主要酶联测定试剂见附录B,反转录聚合酶链式反应(RTPCR)检测试剂见附录C,实时荧光RT-PCR检测试剂见附录D,生物学测定试剂参见附录E.
5样品制备
将马铃薯块茎种植在隔离温室中,于25℃生长并进行症状观察。待长出3~4片叶后将表现症状的植株编号,未表现症状的植株分组(10株为1组)并编号。对采集的叶片进行酶联免疫吸附测定、RT-PCR检测、实时荧光反转录PCR检测、免疫电镜观察或生物学测定。也可以对马铃薯块茎或其他植物材料直接进行检测。