【SN商检标准】 牛羊赤羽病病毒环介导等温扩增检测方法

SN/T 4824-2017.Detection method for Akabane virus of bovine and ovine by LAMP.
1范围
SN/T 4824规定了牛羊赤羽病病毒环介导等温扩增检测方法。
SN/T 4824适用于牛羊赤羽病病毒核酸现场快速初筛检测。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 18088 出入境动物检疫采样
3缩略语
下列缩略语适用于本文件。
AKAV赤羽病病毒( Akabane virus)
LAMP环介导等温扩增(Loop- mediated isothermal amplification)
4赤羽病概况
赤羽病病毒为单股RNA病毒,属布尼病毒科布尼病毒属,由其引发的赤羽病概况参见附录A.
5试剂
5.1 RNA抽提试剂盒。
5.2 Bst DNA聚合酶。
5.3 Betaine 甜菜碱。
5.4 0.01 mol/L PBS缓冲液(见附录B)。
5.510X Thermopol缓冲液。
6设备与材料
6.1冷冻离心机。
6.2 恒温水浴箱。
6.3 生物安全柜。
6.4 移液器
7原理
根据AKAV特异性S基因6个特异区域设计两对引物,在具有连置换活性的Bst DNA聚合酶的作用下，由4条引物识别靶序列上的6个特定区域(参见C.1).在63℃左右对核酸进行等温扩增。扩增产物加入染料后阳性孔会出现肉眼可见的绿色。