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- GB/T 17999.5-1999 SPF鸡 酶联免疫吸附试验

【国家标准(GB)】 SPF鸡 酶联免疫吸附试验
本网站 发布时间:
2024-07-19 01:25:10
- GB/T17999.5-1999
- 已作废
标准号:
GB/T 17999.5-1999
标准名称:
SPF鸡 酶联免疫吸附试验
标准类别:
国家标准(GB)
标准状态:
已作废-
发布日期:
1999-11-10 -
实施日期:
2000-04-01 -
作废日期:
2009-05-01 出版语种:
简体中文下载格式:
.rar.pdf下载大小:
70.20 KB
替代情况:
被GB/T 17999.6-2008代替

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标准简介:
标准下载解压密码:www.bzxz.net
本标准规定了酶联免疫吸附试验所用试剂、材料,操作程序及结果判定等。本标准适用于 SPF鸡感染淋巴白血病病毒后的群特异性抗原的监测。 GB/T 17999.5-1999 SPF鸡 酶联免疫吸附试验 GB/T17999.5-1999

部分标准内容:
GB/T 17999.5—1999
酶联免疫吸附试验(ELISA)是国外监测SPF鸡淋巴白血病病毒感染的通用方法。我国建立的淋巴白血病ELISA方法敏感性高、特异性强、重复性好,已广泛用于商品种鸡场淋巴白血病的净化和SPF鸡场淋巴白血病病毒感染的监测,本标准在此基础上,规定了 SPF鸡酶联免疫吸附试验。SPF鸡微生物学质量控制国家系列标准,包括SPF鸡微生物学监测总则和9种SPF鸡微生物学检测方法。本标准为《SPF鸡酶联免疫吸附试验》。SPF鸡微生物学检测方法还包括以下部分:SPF鸡红细胞凝集抑制试验;
GB/T17999.1-1999
GB/T 17999. 2—1999
GB/T 17999.3—1999
GB/T 17999. 4—1999
GB/T 17999.6.--1999
GB/T 17999.7—1999
GB/T 17999.8—1999
GB/T 17999. 9-1999
血清中和试验;
SPF鸡
SPF鸡
SPF 鸡
SPF鸡
SPF鸡免费标准bzxz.net
SPF鸡
SPF鸡
血清平板凝集试验;
琼脂扩散试验;
胚敏感试验;
鸡白痢沙门氏菌检验;
试管凝集试验;
间接免疫荧光试验。
本标准由中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出。本标准由农业部畜牧兽医司归口。本标准起草单位:农业部实验动物研究中心。本标准主要起草人:陈德威、张冰、赵立红、黄进、李军。80
1范围
中华人民共和国国家标准
酶联免疫吸附试验
SPF鸡
SPF chicken--Enzyme-linked immunosorbent assayGB/T17999.5-1999
本标准规定了酶联免疫吸附试验所用试剂、材料,操作程序及结果判定等。本标准适用于SPF鸡感染淋巴白血病病毒后的群特异性抗原的监测。2原理
检测SPF鸡蛋清中禽白血病病毒主要群特异性抗原P27的方法为双抗体夹心酶联免疫吸附试验。先用抗P27抗体包被酶标板,然后与蛋清作用,蛋清中的P27与包被抗体结合,洗去未结合的物质。再加入HRP-免抗P27抗体,作用后洗去未结合的酶标物。加入底物溶液,出现颜色变化。颜色变化的速度及程度与样品中P27的含量有关。3试剂和器材
3.1试剂
3.1.1包被抗体(兔抗P27IgG)。3.1.2阳性抗原(P27)。
3.1.3阴性抗原。
3.1.4被检蛋清。
3.1.5HRP-兔抗P27。
3.1.6包被液:
0.05mol/I、pH9.6碳酸盐缓冲液配制:碳酸钠1.59g,碳酸氢钠2.93g,蒸馏水加至1000mL。3.1.7洗涤液:
pH7.4、PBS-TWeen20配制:0.01mol/L、pH7.4PBS 1000 mL,吐温-200.5ml.。3.1.8底物溶液:
pH5.0磷酸盐-柠檬酸缓冲液-0OPD-HO,配制0.2mol/L磷酸氢二钠溶液25.7ml.0.1mol/L柠檬酸溶液24.3ml,蒸馏水50ml.,邻苯二胺(0PD)40mg,30%H,O,0.15ml。3.1.9终止液:2mol/1.硫酸。
3.2器材
3.2.1酶标板。
3.2.2移液器。
3.2.3恒温培养箱。
3.2.4ELISA读数仪。
4操作程序
4.1抗体包被:用包被液将兔抗P271gG作适当稀释,每孔100pL,4C过夜国家质量技术监督局1999-11~10批准2000-04~01实施
GB/T17999.5--1999
4.2洗涤:甩去包被液,每孔加满洗涤液(约300uL),静置3min,甩干,如此重复3次。4.3加样:每孔加100μL被检蛋清,设阳性、阴性对照孔,每个样品加两孔,37C作用60min。甩去样品,洗涤同上。
4.4每孔加HRP-免抗P27(工作浓度)100μL,37C作用45min~60min,甩去HRP-兔抗P27液,洗涤同上。
4.5加底物溶液:每孔加100μL新配制的底物溶液,避光作用15min。4.6终止反应:每孔加终止液100μL。4.7读OD值:终止反应后,迅速置ELISA读数仪上于490nm处读出各孔的OD值。5结果判定
5.1当阳性对照OD值与阴性对照OD值之差大于或等于0.3时,试验结果可靠。5.2按式(1)计算被检样品的S/P比值:样品OD值均数一阴性对照OD值均数S/P=阳桂照OD值均数一荫程对照 OD值均数式中:S——样品D值;
阳性对照OD值。
5.3判定:S/P≥0.2,判为阳性;S/P<0.2,判为阴性。82
·(1)
小提示:此标准内容仅展示完整标准里的部分截取内容,若需要完整标准请到上方自行免费下载完整标准文档。
酶联免疫吸附试验(ELISA)是国外监测SPF鸡淋巴白血病病毒感染的通用方法。我国建立的淋巴白血病ELISA方法敏感性高、特异性强、重复性好,已广泛用于商品种鸡场淋巴白血病的净化和SPF鸡场淋巴白血病病毒感染的监测,本标准在此基础上,规定了 SPF鸡酶联免疫吸附试验。SPF鸡微生物学质量控制国家系列标准,包括SPF鸡微生物学监测总则和9种SPF鸡微生物学检测方法。本标准为《SPF鸡酶联免疫吸附试验》。SPF鸡微生物学检测方法还包括以下部分:SPF鸡红细胞凝集抑制试验;
GB/T17999.1-1999
GB/T 17999. 2—1999
GB/T 17999.3—1999
GB/T 17999. 4—1999
GB/T 17999.6.--1999
GB/T 17999.7—1999
GB/T 17999.8—1999
GB/T 17999. 9-1999
血清中和试验;
SPF鸡
SPF鸡
SPF 鸡
SPF鸡
SPF鸡免费标准bzxz.net
SPF鸡
SPF鸡
血清平板凝集试验;
琼脂扩散试验;
胚敏感试验;
鸡白痢沙门氏菌检验;
试管凝集试验;
间接免疫荧光试验。
本标准由中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出。本标准由农业部畜牧兽医司归口。本标准起草单位:农业部实验动物研究中心。本标准主要起草人:陈德威、张冰、赵立红、黄进、李军。80
1范围
中华人民共和国国家标准
酶联免疫吸附试验
SPF鸡
SPF chicken--Enzyme-linked immunosorbent assayGB/T17999.5-1999
本标准规定了酶联免疫吸附试验所用试剂、材料,操作程序及结果判定等。本标准适用于SPF鸡感染淋巴白血病病毒后的群特异性抗原的监测。2原理
检测SPF鸡蛋清中禽白血病病毒主要群特异性抗原P27的方法为双抗体夹心酶联免疫吸附试验。先用抗P27抗体包被酶标板,然后与蛋清作用,蛋清中的P27与包被抗体结合,洗去未结合的物质。再加入HRP-免抗P27抗体,作用后洗去未结合的酶标物。加入底物溶液,出现颜色变化。颜色变化的速度及程度与样品中P27的含量有关。3试剂和器材
3.1试剂
3.1.1包被抗体(兔抗P27IgG)。3.1.2阳性抗原(P27)。
3.1.3阴性抗原。
3.1.4被检蛋清。
3.1.5HRP-兔抗P27。
3.1.6包被液:
0.05mol/I、pH9.6碳酸盐缓冲液配制:碳酸钠1.59g,碳酸氢钠2.93g,蒸馏水加至1000mL。3.1.7洗涤液:
pH7.4、PBS-TWeen20配制:0.01mol/L、pH7.4PBS 1000 mL,吐温-200.5ml.。3.1.8底物溶液:
pH5.0磷酸盐-柠檬酸缓冲液-0OPD-HO,配制0.2mol/L磷酸氢二钠溶液25.7ml.0.1mol/L柠檬酸溶液24.3ml,蒸馏水50ml.,邻苯二胺(0PD)40mg,30%H,O,0.15ml。3.1.9终止液:2mol/1.硫酸。
3.2器材
3.2.1酶标板。
3.2.2移液器。
3.2.3恒温培养箱。
3.2.4ELISA读数仪。
4操作程序
4.1抗体包被:用包被液将兔抗P271gG作适当稀释,每孔100pL,4C过夜国家质量技术监督局1999-11~10批准2000-04~01实施
GB/T17999.5--1999
4.2洗涤:甩去包被液,每孔加满洗涤液(约300uL),静置3min,甩干,如此重复3次。4.3加样:每孔加100μL被检蛋清,设阳性、阴性对照孔,每个样品加两孔,37C作用60min。甩去样品,洗涤同上。
4.4每孔加HRP-免抗P27(工作浓度)100μL,37C作用45min~60min,甩去HRP-兔抗P27液,洗涤同上。
4.5加底物溶液:每孔加100μL新配制的底物溶液,避光作用15min。4.6终止反应:每孔加终止液100μL。4.7读OD值:终止反应后,迅速置ELISA读数仪上于490nm处读出各孔的OD值。5结果判定
5.1当阳性对照OD值与阴性对照OD值之差大于或等于0.3时,试验结果可靠。5.2按式(1)计算被检样品的S/P比值:样品OD值均数一阴性对照OD值均数S/P=阳桂照OD值均数一荫程对照 OD值均数式中:S——样品D值;
阳性对照OD值。
5.3判定:S/P≥0.2,判为阳性;S/P<0.2,判为阴性。82
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