【国家标准(GB)】 食品中胆固醇的测定 高效液相色谱法

ICS 67. 050
中华人民共和国国家标准
GB/T22220-—2008
食品中胆固醇的测定
高效液相色谱法
Determination of cholesterol in foods--High-performance liquid chromatography2008-05-16发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会
2008-10-01实施
本标准由中国计量科学研究院提出前言
本标准由全国食品工业标准化技术委员会归口。GB/T22220—2008
本标准起草单位：中国计量科学研究院，北京市营养源研究所、北京锦绣大地检测中心。本标准主要起草人·王晶、盛灵慧、李黎、刘玉蜂、唐华澄、赵孟彬、尚燕芬。I
食品中胆固醇的测定
高效液相色谱法
本标准规定了高效液相色谱法测定食品中固醇的条件和详细分析步骤。本标准适用于食品中胆固醇含量的测定。本标准最低检出限为2.6tng/100g。2规范性引用文件
GB/T 22220--2008
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的静设单（不包括斯误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协设的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—1992,neqISO3696：1987）3方法提要
样品经无水乙醇-氢氧化钾溶液皂化，石油醚和无水乙醚混合溶液提取，甲醇溶解定量后，采用高效液相色谱仪测定，外标法定量。4试剂和溶液
除非另有说明，在分析中应使用分析纯试剂，水为GB/T6682推荐使用的一级水。4.1甲醇：色谱纯。
4.2无水乙醇。
4. 3石油醚:沸程 30 ℃~60 ℃。4.4无水乙醚。
4.5无水硫酸钠。
4. 6氢氧化钾。
4.760%氢氧化钾溶液：称取60 各氢氧化钾,加水 40mL混合溶解。4.B胆固醇:纯度≥99%。
4,9标准贮备液：称取胆固醇标准品0.05g(精确至0.1tmg),用无水乙醇溶解定容至50mL，溶液每毫升相当于 1 tg胆固醇，放置 4℃密封可贮裁半年。4.10标准工作溶液：分别吸取标准贮备薇（4.9)1.0mL,2.0mL,3.0mL,5.0mL，用无水乙醇定容至10 mL ,配制分别相当于 0. 1 Ⅱg/mL,0.2 mg/mL,0. 3 mg/mL,0. 5mg/mL浓度标准溶液。5仪器和设备
实验室常规仪器设备和以下各项。5.1高效液相色谱仪：具有紫外检测器或相当的检测器。5.2分析天平感量0.1mg。
5. 3色谱柱:c反相色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 um)。1
GB/T 22220—2008
6分析步骤
6.1样品处理
6. 1.1皂化
称取粉碎均匀的样品 0.25 g~10 g(胆固醇含量约为 0. 5 mg~5 mg,精确至 0. 1 mg),于 250 ml平底烧瓶中,加入30 mL无水乙醇,10mL 60%氢氧化钾溶液(4.7),混勾。将试样在100 C磁力搅拌加热电热套皂化回流1h，不时振荡防止试样粘附在瓶壁上，皂化结束，用5mL无水乙醇（4.2）自冷管顽端冲洗其内部，取下圆底烧瓶，冷却至室温。6.1.2提取
定量转移全部皂化液于250mL分液蒲斗中，用30mL水分2次~3次冲洗圆底烧瓶，洗液并人分液漏斗,再用 40 mL石油醚和乙醚混合液(1十1,体积比)分 2 次~～3 次冲洗平底烧瓶并人分液漏斗,振播 2 min,静置,分层。转移水相于第二个分液漏斗,再用 30 mL石油醛和乙醚混合液(1十1,体积比)重复提取两次，弃去水相，合并三次有机相,用蒸馏水每次100mL洗涤提取液至中性，初次水洗时轻轻旋摇，防止乳化,提取液通过药10 g无水硫酸钠(4.5)脱水,转移到150mL平底烧瓶中。6.1.3浓编
将上述平底烧瓶中的提取液在真空条件下蒸发至近干，用无水乙醇（4.2)溶解定容至5mL，溶液通过0.45切过滤膜过，收集清滋于进样瓶中，待色谱仪测是6.2剩定
6.2. 1色谱参考条件
色谱柱：Cl反相色谱柱（4.6mm×150mm,5μm)：柱温：38℃；
流动相：甲醇，
流速:1.0 mL/min;
测定波长：205ntml
进样量;10 μL。
6.2.2标准曲线绘制
分别取10uL标推工作液(4.10)注人高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定标准溶液的响应值（峰面积），以浓度为横坐标、蜂面积为纵坐标，绘制标准曲线。6.2.3样品中胆固薄的测定
联10L样液（6.工，3注入高效相色潜这，在上述色谱条件下测定试样的响应值（蜂面积）。由标准曲线上查得样液中胆固薛的含量，或利用回归方程式计算样液中胆固醇含量。7 结果计算
样品中胆固醇的含量（）以毫克每百克（/100区）表示按式（1）计算：-EXV×100此内容来自标准下载网
r-——样品中胆固醇的含量，单位为毫克每百克(mg/100 g);c—样液中胆固醇的含量,单位为旁克每毫升(mg/mL)1V--一定容体积,单位为毫升(mL)；m—样品质量，单位为克(g)。
平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。2
8充许差
GB/T 22220--2008
在同-实验室，由同一操作者使用相同的设备，按相同的测试方法，对同一样品独立进行测试获得的两欲独立测试结果的绝对差值不超过10%。
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